1、鋅指轉(zhuǎn)錄因子KLF4主要參與細胞增殖、分化、凋亡和自我更新在內(nèi)的多種生理過程，在個體發(fā)育、應答細胞內(nèi)外壓力和多種疾病的病理過程中決定著細胞的命運。因此KLF4的調(diào)控機制就顯得尤為重要。作為一個與細胞周期和分化密切相關(guān)的基因，KLF4在轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后和翻譯后水平都受到精密的調(diào)節(jié)。泛素化修飾是KLF4的翻譯后修飾十分重要的一個方面，KLF4的蛋白量在細胞內(nèi)受到泛素-蛋白酶體途徑的嚴密控制，然而影響KLF4泛素化的機制目前仍未十分明確。我們的工

2、作即著眼于參與KLF4泛素化調(diào)節(jié)的E3連接酶系統(tǒng)。
　　首先我們購買了E3泛素連接酶siRNA文庫，該文庫主要包括F-box家族、SOCS-box家族和Cullin家族等約200個基因的特異性siRNA。利用該文庫，我們在乳腺癌細胞中進行了針對E3泛素連接酶相關(guān)基因的siRNA敲降，以Westernblotting方法篩選敲降后會影響KLF4蛋白水平的E3連接酶。通過篩選文庫我們首先發(fā)現(xiàn)了17個敲降后導致KLF4蛋白水平上升的基因

3、作為候選E3連接酶，然后我們從cDNA中通過PCR擴增得到了五個候選E3連接酶基因，接著我們利用放線菌酮追蹤實驗發(fā)現(xiàn)FBXO32可以顯著促進外源KLF4蛋白的降解。于是我們選擇了FBXO32作為研究對象進行了進一步的研究工作，證明了FBXO32可以特異性泛素化KLF4并促進KLF4通過泛素-蛋白酶體途徑降解。我們又對FBXO32泛素化KLF4的具體機制進行了研究，發(fā)現(xiàn)FBXO32的羧基端能夠與KLF4的氨基端直接結(jié)合，并泛素化修飾KLF

4、4的羧基末端，并且F-box結(jié)構(gòu)域是FBXO32促進KLF4泛素化降解的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域。此外FBXO32介導的KLF4泛素化降解很有可能依賴于p38通路對KLF4的磷酸化。
　　隨后，我們對FBXO32泛素化降解KLF4在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用進行了初步的研究和探討。KLF4在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用自該基因被發(fā)現(xiàn)以來一直是人們關(guān)注的熱點。但由于KLF4在細胞生命活動中的廣泛參與——比如KLF4在抑制增殖的同時也具有抑制凋亡的特性，又如它

5、在高分化的結(jié)腸隱窩上皮細胞中表達，但又具有誘導成年人成纖維細胞恢復干性的能力——使得KLF4在腫瘤中的功能因組織、細胞遺傳背景和外界環(huán)境而異。由于細胞遺傳背景的異質(zhì)性，KLF4在乳腺癌中的功能更加撲朔迷離，KLF4促進或者抑制乳腺癌的能力對基因表達背景和壓力刺激的依賴性更大。我們的工作發(fā)現(xiàn)，在正常狀態(tài)下，F(xiàn)BXO32敲降導致的KLF4蛋白積累抑制了永生化乳腺上皮細胞的遷移能力，但在亞致死劑量DNA損傷的情況下，F(xiàn)BXO32過表達導致的K