1、目的：建立大鼠帶血管膝關(guān)節(jié)移植模型，研究不同組膝關(guān)節(jié)移植后，大鼠外周血單個核細(xì)胞(PBMC)中 CD45相關(guān)細(xì)胞的變化規(guī)律，探討可用于早期診斷骨關(guān)節(jié)移植后移植排斥反應(yīng)的指標(biāo)，并通過觀察不同實驗組術(shù)后免疫排斥反應(yīng)情況，驗證深低溫二步冷凍法可否降低移植物的抗原性，減弱移植排斥反應(yīng)。
　　方法：利用顯微外科技術(shù)，建立SD/Wistar大鼠帶血管膝關(guān)節(jié)移植模型，A組：帶血管自體膝關(guān)節(jié)移植，B組：新鮮帶血管同種異體膝關(guān)節(jié)移植，C組：冷凍保存

2、帶血管同種異體膝關(guān)節(jié)移植。術(shù)后均不使用免疫抑制劑，于術(shù)前及術(shù)后1天、3天、5天、7天、9天各采血500ul，利用流式細(xì)胞儀(FCM)，檢測外周血單個核細(xì)胞中CD4+CD45RC+、CD4+細(xì)胞百分比的變化。觀察各組動物術(shù)后排斥反應(yīng)，并于術(shù)后第3天、第6天和第9天切取移植動脈做蘇木精-伊紅(HE)染色，行病理組織學(xué)檢查。
　　結(jié)果：1、各組大鼠術(shù)前和術(shù)后第1天所測得外周血單個核細(xì)胞中CD4+CD45RC+、CD4+細(xì)胞百分比無明顯變

3、化(P>0.05)，三組間無顯著性差異(P>0.05)。2、A組大鼠術(shù)后第3天和第5天測得外周血單個核細(xì)胞中CD4+CD45RC+細(xì)胞百分比較手術(shù)前下降(P<0.05)，隨后出現(xiàn)回升趨勢，術(shù)后第9天恢復(fù)至手術(shù)前水平。B組大鼠在術(shù)后第3天外周血單個核細(xì)胞中CD4+CD45RC+細(xì)胞百分比明顯升高，與A組和 C組測得結(jié)果相比差別有顯著性(P<0.001)，術(shù)后第5天有輕度下降，但仍高于 A組和C組所測結(jié)果(P<0.05)。C組冷凍保存異體移

4、植組外周血單個核細(xì)胞中CD4+CD45RC+細(xì)胞百分比僅在術(shù)后第3天略有升高，之后恢復(fù)至術(shù)前水平，與A相比較無顯著差異性(P>0.05)。A組和C組大鼠外周血單個核細(xì)胞中CD4+細(xì)胞百分比至術(shù)后第5天恢復(fù)至術(shù)前水平(P>0.05)，B組新鮮異體移植組大鼠在術(shù)后第3天開始明顯升高，并有上升趨勢，與A組和C組測得結(jié)果相比差別有顯著性(P<0.01)。3、A組和 C兩組移植動脈內(nèi)皮細(xì)胞未見明顯脫落，內(nèi)皮細(xì)胞間隙無明顯增寬，僅有少許炎性細(xì)胞浸潤

5、，血管壁增厚，但血管保持通暢，B組移植血管內(nèi)皮細(xì)胞術(shù)后第3天開始脫落，中層彈力纖維暴露，術(shù)后第6天血管全層大量炎性細(xì)胞浸潤，術(shù)后第9天管腔完全栓塞，出現(xiàn)肉芽組織及血管再通現(xiàn)象。結(jié)論：1、二步深低溫冷凍技術(shù)能降低帶血管同種異體關(guān)節(jié)的免疫原性，宿主產(chǎn)生免疫耐受，免疫排斥反應(yīng)減輕，有助于吻合血管通暢，移植物的成活。2、新鮮帶血管同種異體骨移植后外周血單個核細(xì)胞中 CD4+CD45RC+細(xì)胞百分比較術(shù)前、自體移植組和冷凍保存移植組均有顯著變化，