1、目的：
　　rs4644是 galectin-3基因編碼區(qū)的單核苷酸多態(tài)(single nucleotide polymorphism，SNP)位點，該位點處等位基因C被A所替換，導致galectin-3蛋白序列的第191位的氨基酸由脯氨酸（P）變?yōu)榻M氨酸(H)。從而影響galectin-3的生物學行為。本研究旨在通過分析rs4644在乳腺癌患者中的分布情況，探討rs4644與中國女性乳腺癌發(fā)生、發(fā)展的關系。
　　聚腺苷酸二

2、磷酸核糖核苷酸聚合酶-1(poly(ADP-ribose)polymerase-1，PARP-1)是一種 DNA損傷修復酶，它可以催化合成聚腺苷酸二磷酸核糖(pol（ADP-ribose），PAR)，參與DNA損傷的修復過程。PAR可以反映細胞內PARP-1活性，被認為是一種潛在的預測 PARP-1抑制劑治療敏感性的生物標記分子。rs1136410是PARP-1單核苷酸多態(tài)性位點（single nucleotide polymorphi

3、sm，SNP），它可以影響PARP-1活性。雖然PARP-1抑制劑在三陰性乳腺癌治療已經進入Ⅲ期臨床試驗，但是可靠的評估 PARP-1抑制劑治療敏感性的生物標記分子是缺乏的。因此，我們的實驗旨在分析PAR在三陰性和非三陰性乳腺癌的表達差異以及PARP-1活性位點rs1136410與PAR表達的相關性。
　　方法：
　　應用限制性片段長度多態(tài)性聚合酶鏈反應（reaction-restriction fragment lengt

4、h polymorphism，PCR-RFLP）方法檢測172例乳腺癌患者凍存腫瘤組織和17例新鮮良性乳腺組織 rs4644基因型，隨機選取10例 PCR樣本測序，驗證PCR-RFLP的實驗結果。
　　使用PAR抗體（MA1-9043910H Thermo）,運用免疫組織化學染色的方法檢測32例三陰性以及39例非三陰性乳腺癌的石蠟固定標本，并同時提取相對應病例的凍存組織的基因組DNA，檢測rs1136410等位基因的位點差異。

5、r>　　結果：
　　1. PCR產物經NCOI酶切后，野生純合子（CC）型為324bp一條帶；雜合子（CA）型為324bp、171bp和153 bp三條帶；突變純合子(AA)為171、153雙條帶。由于2％瓊脂糖凝膠電泳無法分辨171bp和153bp條帶，僅顯示160bp左右融合條帶（圖1）。隨機抽取10例PCR產物測序結果與電泳一致。
　　2.乳腺癌組基因型分布為CC型125例（72.7％），CA型43例（25.0％），A

6、A型4例（2.3%）；C、A等位基因頻率分別為293（85.2％），51（14.8％）；對照組基因型分布為CC型9例（52.9％），CA型7例（41.2％），AA型1例（5.9%）；C、A等位基因的頻率分別為25（73.5％），9（26.5％）。兩組基因型及等位基因頻率分布均無明顯統(tǒng)計學差異。
　　3. rs4644 A等位基因更容易出現(xiàn)在腫物 T＞2cm及 ki-67<14%的乳腺癌人群（P<0.05），而與患者年齡，組織學分級

7、，淋巴結轉移，受體狀態(tài)及p53表達無明顯相關性。
　　4.免疫組化染色結果顯示 PAR呈現(xiàn)不同的細胞定位著色，大部分病例為強-中等的細胞核著色，另一部分病例為中等細胞質著色，PAR的著色特點與我們之前報道 PARP-1著色定位相似。
　　5.在三陰性乳腺癌中，62.5%的病例表現(xiàn)為胞核PAR低表達，而37.5%的病例表現(xiàn)為胞核PAR高表達；與此相反，在非三陰性乳腺癌中，僅28.2%病例表現(xiàn)為核PAR低表達，而71.8%的病例

8、表現(xiàn)為核PAR高表達。統(tǒng)計學分析顯示在非三陰性乳腺癌中，核 PAR高表達比例明顯高于三陰性乳腺癌（χ2=8.404，P=0.004）。
　　6.胞質PAR表達的陽性比例與陰性比例在三陰性乳腺中均為50%;在非三陰性乳腺癌中，20.5%病例表現(xiàn)為胞質PAR的陽性表達，79.5%的病例表現(xiàn)為陰性表達；三陰性乳腺癌胞質 PAR的陽性表達明顯高于非三陰性乳腺癌（χ2=6.830，P=0.009）。
　　7.不考慮是三陰性還是非三陰性

9、乳腺癌來源，我們整體比較核 PAR和胞質PAR表達的相關性，分析結果顯示，46.5%的病例表現(xiàn)為核 PAR高表達而胞質PAR陰性表達；23.9%病例表現(xiàn)胞質PAR陽性表達而核PAR低表達。統(tǒng)計學分析顯示胞質PAR與核PAR表達成負相關（r=-0.391，P=0.001）。
　　8.細胞內PAR的水平可能會依賴于PARP-1表達高低，基于這一假設，我們分析PAR與PARP-1表達的關系（PARP-1的表達已在之前文章報道），分別比較

10、二者胞核和胞質表達發(fā)現(xiàn)，11.3%病例表現(xiàn)為核 PAR高表達而核PARP-1低表達,24.0%病例表現(xiàn)為核 PARP-1高表達而核 PAR低表達（P=0.054）;21%病例表現(xiàn)為胞質PAR陽性表達而胞質PARP-1陰性表達，12.7%病例表現(xiàn)為胞質PARP-1陽性表達而胞質PAR陰性表達（P=0.448）。無論是胞質還是胞核表達，均未發(fā)現(xiàn)PAR與PARP-1表達的明顯的相關性。
　　9.分別比較胞質PAR及胞核PAR表達與rs1

11、136410基因型以及等位基因頻率之間關系，未見明顯的相關性。
　　結論：
　　1. Galectin-3基因191位基因多態(tài)性 rs4644與乳腺癌的發(fā)生無明顯相關性，其與腫瘤大小及ki-67密切相關，提示rs4644在腫瘤生長及耐藥過程中發(fā)揮一定生物學功能。
　　2.三陰性乳腺癌更常表現(xiàn)為胞質PAR陽性表達而核PAR低表達模式，然而，非三陰性乳腺癌中,核PAR高表達則更為常見;胞質PAR和胞核PAR表達之間呈負相關