1、目的： 本實(shí)驗(yàn)采用兔失血性休克復(fù)合內(nèi)毒素ALI模型，觀察失血性休克復(fù)合內(nèi)毒素ALI兔NF-κB的變化規(guī)律，探討ALI的發(fā)生發(fā)展與NF-κB的活化關(guān)系，研究應(yīng)用烏司他丁抑制NF-κB的活化治療ALI的機(jī)制，以期為烏司他丁臨床治療ALI提供理論依據(jù)。 方法： 1、實(shí)驗(yàn)分組 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用新西蘭大耳白兔90只，隨機(jī)分為3組：對(duì)照組(A組)、失血性休克復(fù)合內(nèi)毒素組(B組)、失血性休克復(fù)合內(nèi)毒素＋烏司他丁治療組(C組

2、)。A、B、C組動(dòng)物均進(jìn)行麻醉、固定、動(dòng)靜脈插管，操作成功后，B、C組動(dòng)物在15分鐘內(nèi)經(jīng)股動(dòng)脈放血至平均動(dòng)脈壓(MAP)40±5mmHg(記錄放血量)，通過放血或回輸?shù)姆绞骄S持MAP在該水平60分鐘后開始，在2h內(nèi)用微泵由股靜脈回輸放出的自身血液及放血量2倍的乳酸鈉林格氏液復(fù)蘇；B組動(dòng)物復(fù)蘇結(jié)束后用微泵將大腸桿菌內(nèi)毒素(LPS)50ug/kg(稀釋成5ml)于30分鐘內(nèi)自靜脈內(nèi)泵入；C組動(dòng)物于泵入與B組相同劑量LPS前靜推烏司他丁500

3、00U/kg(20000U/ml)；A組只給予麻醉、置管，不予放血及復(fù)蘇，在B、C組給予LPS的相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)，輸入與其相同劑量的生理鹽水。各組分別于制模成功后1h、4h、8h、24h、48h檢測(cè)動(dòng)脈血氧分壓、血清TNF-α含量、肺組織內(nèi)NF-κB含量、肺干濕重比(D/W)，并行肺組織學(xué)檢查。 2、主要實(shí)驗(yàn)方法 (1)用失血性休克復(fù)合內(nèi)毒素打擊法制作大耳白兔ALI模型； (2)用GEM P300血?dú)夥治鰞x進(jìn)行血?dú)夥治?/p>

4、檢查； (3)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)法測(cè)定血清腫瘤壞死因子α(TNF-α)濃度； (4)采用免疫組織化學(xué)的方法觀察肺組織內(nèi)NF-κB的變化情況，并用Smart Scape圖像分析儀對(duì)結(jié)果進(jìn)行半定量分析； (5)觀察各組肺大體外觀，取左肺計(jì)算肺D/W，右肺下葉觀察肺組織病理學(xué)改變； 3、統(tǒng)計(jì)方法 用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)采用X±SD表示，采用重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的兩因

5、素多水平方差分析，兩變量間的關(guān)系采用直線相關(guān)分析。P＞0.05為統(tǒng)計(jì)學(xué)無(wú)差異，P＜0.05或P＜0.01為統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著。 結(jié)果： 1、各組動(dòng)物的PaO2改變存在組間差別(P＜0.01)，各組PaO2在不同時(shí)間點(diǎn)變化的趨勢(shì)不同(P＜0.01)。其中B組動(dòng)物各時(shí)相點(diǎn)PaO2均呈進(jìn)行性下降，而C組PaO2在4h時(shí)達(dá)到最低值后逐漸上升，8h、24h、48h時(shí)均較B組明顯升高(P＜0.05)。 2、各組動(dòng)物的TNF-α改

6、變存在組間差別(P＜0.01)，各組TNF-α在不同時(shí)間點(diǎn)變化的趨勢(shì)不同(P＜0.01)。其中B、C組動(dòng)物1h后TNF-α均顯著高于A組，并均于4h達(dá)到最高峰，隨后逐漸下降，但C組降幅較B組明顯(P＜0.05)。 3、免疫組織化學(xué)結(jié)果發(fā)現(xiàn)：B、C組動(dòng)物肺組織內(nèi)NF-κB p65蛋白呈棕黃色陽(yáng)性反應(yīng)，其中B組NF-κB p65呈強(qiáng)陽(yáng)性免疫反應(yīng)；C組NF-κB p65呈弱陽(yáng)性免疫反應(yīng)。Smart Scape圖像分析后發(fā)現(xiàn)：各組動(dòng)物的

7、NF-κB p65活化程度存在組間差別(P＜0.01)，各組NF-κB p65在不同時(shí)間點(diǎn)變化的趨勢(shì)不同(P＜0.01)。其中B、C組動(dòng)物1h后NF-κB p65均顯著高于A組，并均于4h達(dá)到最高峰，隨后逐漸下降，但C組降幅較B組明顯(P＜0.05)。 4、各組動(dòng)物的肺組織D/W值改變存在組間差別(P＜0.01)，各組D/W在不同時(shí)間點(diǎn)變化的趨勢(shì)不同(P＜0.01)。其中B組動(dòng)物D/W進(jìn)行性下降，而C組D/W在8h時(shí)達(dá)到最低值后

8、逐漸上升(P＜0.05)。 5、B組動(dòng)物1h、4h、8h、24h、48h NF-κB活性與TNF-α含量相關(guān)性分析顯示，NF-κB活性與TNF-α含量之間的變化存在顯著相關(guān)性(r=0.8240，r=0.8760，r=0.8130，r=0.8260，r=0.8410。P＜0.05)。 6、肺組織病理切片示B組動(dòng)物可見肺泡壁增厚、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、局灶出血、血栓形成、部分肺泡萎陷、肺泡腔內(nèi)可見水腫液，而C組動(dòng)物肺組織可見少量炎性

9、細(xì)胞浸潤(rùn)，出血少見，肺間質(zhì)充血、水腫等病理改變較B組顯著減輕。兩者均隨時(shí)間延長(zhǎng)而加重。 結(jié)論： 1、ALI早期肺組織NF-κB的活性表達(dá)、血清TNF-α的含量均明顯升高，且與動(dòng)物的病情輕重相關(guān)，提示NF-κB和TNF-α參與了ALI早期的肺組織損傷并發(fā)揮重要作用。 2、相關(guān)分析提示，ALI早期NF-κB激活與TNF-α釋放之間的變化存在顯著相關(guān)性，提示NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活化，促進(jìn)早期炎癥因子大量釋放，導(dǎo)致A