1、口蹄疫（Foot-and-Mouth disease，FMD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-Mouth disease virus，FMDV）引起偶蹄動物感染的烈性傳染病之一。目前FMD呈世界范圍流行趨勢，其血清型有O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3和Asia1型共7種，其中O型、Asia1型FMD在我國有過報道，特別是近幾年來O型、和Asia1型FMD在我國周邊國家或東南亞地區(qū)時有發(fā)生，對我國養(yǎng)殖業(yè)構成了嚴重的威脅。

2、　　目前用于FMD疫苗研制的重組病毒活載體主要有脊髓灰質炎病毒、牛鼻氣管炎病毒、煙草花葉病毒、桿狀病毒及雞痘病毒等。雞痘病毒轉移載體具有其它載體無可比擬的優(yōu)勢，具體表現為：雞痘病毒基因組結構較為龐大，能容納較大的外源基因；外源蛋白可被正確地表達，并在感染細胞中得到忠實地修飾，如糖基化、羧基化等；外源基因表達產物具有良好的免疫原性，可誘導機體產生持續(xù)時間較長的細胞免疫和體液免疫；嚴格的胞漿內復制，避免了病毒基因重組入宿主細胞染色體的可能性

3、，消除了重組病毒應用后對人畜的潛在威脅。本研究所使用的雞痘病毒轉移載體是以人工合成的串聯的痘苗病毒突變型 p7.5啟動子以及由牛痘病毒A型包涵體（ATI）啟動子構成的復合啟動子作為啟動外源基因的啟動子，可以大大提高外源基因的表達量。
　　本研究從含有口蹄疫病毒（FMDV）的牛水皰液中提取總 RNA，采用逆轉錄-聚合酶鏈式反應（RT-PCR）擴增Asia-I/JL株FMDV衣殼蛋白前體P1-2A基因及蛋白酶3C基因，并將其克隆到pM

4、D18-T載體,通過對重組質粒的酶切鑒定，成功克隆了 FMDV衣殼蛋白前體 P1-2A基因和蛋白酶3C基因，其大小分別為2223bp和639bp,并構建了 DNA重組質粒 T-P1-2A-3C，經酶切獲得 Asia-I型P1-2A-3C基因。以軍事獸醫(yī)研究所張洪勇博士構建的O型 FMDV克隆質粒T-P1-2A、質粒pUMT-IL18為基礎，構建了DNA重組質粒T-P1-2A-IL18，經酶切獲得O型口蹄疫病毒P1-2A-IL18基因。<

5、br>　　將酶切得到FMDV Asia-I型P1-2A-3C基因與FMDV O型P1-2A-IL18基因克隆至雞痘病毒表達載體質粒 pUTAL上，構建重組雞痘病毒轉移載體質粒vUTAL-P1-2A-IL-18-P1-2A-3C。通過脂質體轉染法，將vUTAL-P1-2A-3C-P1-2A-IL18與雞痘病毒282E4株共轉染雞胚成纖維細胞(CEF)，通過Brdu三次加壓篩選，挑選出單克隆重組病毒株,經 RT-PCR和間接免疫熒光法檢測，

6、篩選出1株重組雞痘病毒在 CEF中能正確表達P1-2A-IL-18-P1-2A-3C基因盒。成功獲得了一株共表達O型和Asia-I型口蹄疫病毒 P1-2A-IL18基因和 P1-2A-3C基因的重組雞痘毒活載體疫苗候選株vUTAL-P1-2A-3C-P1-2A-IL18。以107 PFU/次的毒量接種小鼠，經三次免疫后測定小鼠血清中抗FMDV特異性抗體水平、脾T淋巴細胞亞類數量變化以及特異性CTL殺傷活性等。
　　結果顯示：該重組