1、乳腺癌是威脅人類健康的重要疾病之一，目前在對于乳腺癌的多項(xiàng)研究中，“上皮-間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)換EMT”過程在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移等過程中發(fā)揮的作用越來越受到人們的重視。作為介導(dǎo)EMT過程的重要轉(zhuǎn)錄因子之一，Slug在EMT過程及其相關(guān)的腫瘤多個方面的作用已被廣泛認(rèn)可并持續(xù)成為相關(guān)領(lǐng)域的熱點(diǎn)。
　　在本次研究中，通過慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾以及后續(xù)對于相關(guān)表達(dá)譜芯片數(shù)據(jù)的分析，我們成功建立起Slug表達(dá)干擾的MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞

2、系研究系統(tǒng)，并在其中篩選出一系列表達(dá)受到Slug調(diào)控的相關(guān)基因，并最終將ARHGDIB基因確定為后續(xù)研究的靶標(biāo)基因。通過定量PCR以及免疫印跡實(shí)驗(yàn)的檢測，我們證實(shí)了在MDA231細(xì)胞中Slug對于ARHGDIB基因的表達(dá)在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平都確實(shí)存在著正向調(diào)控，但體外熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)顯示Slug對于ARHGDIB基因啟動子活性并不存在顯著的影響，表明Slug對于ARHGDIB的調(diào)控存在著更為深入的機(jī)制。
　　同時，通過在MDA23

3、1細(xì)胞中的RhoGTPases活性分析實(shí)驗(yàn)，我們證實(shí)了Slug同RhoA蛋白的表達(dá)之間存在正相關(guān)，并對于Rac1以及Cdc42兩種RhoGTPase的表達(dá)和激活均存在著較為明顯的正向調(diào)控作用。進(jìn)一步的通過免疫熒光實(shí)驗(yàn)，我們對于RhoGDI2蛋白在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)定位進(jìn)行了研究，結(jié)果表明細(xì)胞內(nèi)Slug基因的表達(dá)干擾會使得RhoGDI2蛋白更多的分布于細(xì)胞質(zhì)中，由此推測由Slug引起的RhoGDI2細(xì)胞內(nèi)定位改變可能對于Slug調(diào)控RhoGTP

4、ases的活性具有重要意義。
　　此外，通過進(jìn)一步的深入探索，我們發(fā)現(xiàn)Slug對于RhoGTPases相關(guān)下游信號通路中重要蛋白JNK的表達(dá)、磷酸化水平以及AP-1家族成員c-Jun蛋白的表達(dá)也具有相應(yīng)的正向調(diào)控作用;但同作為AP-1轉(zhuǎn)錄因子的重要成員之一，F(xiàn)ra1蛋白的表達(dá)卻在我們的實(shí)驗(yàn)中被證實(shí)同Slug之間存在著反向的關(guān)系。另外，通過體外熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)，我們還發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)c-Jun蛋白的過表達(dá)對于ARHGDIB基因啟動子的