1、胞外蛋白酶是昆蟲病原真菌入侵寄主過程中的一個重要毒力因子，在降解昆蟲體壁，感染并致死寄主過程中發(fā)揮著關(guān)鍵的作用。而胞外蛋白酶具有高度的基質(zhì)特異性，且極易受底物的誘導(dǎo)調(diào)控。本研究將通過對根蟲瘟霉(Zoophthoraradicans)原始菌株以及轉(zhuǎn)寄主菌株在不同培養(yǎng)條件下胞外蛋白酶活和電泳酶譜的變化分析，結(jié)合采用不同蛋白酶抑制劑對相關(guān)胞外蛋白酶類型的鑒定，證實(shí)了根蟲瘟霉菌株擁有豐富的胞外蛋白酶類型，并能根據(jù)外界不同底物對蛋白酶系采取選擇性

2、表達(dá)。表明菌株在轉(zhuǎn)寄主過程中特異性胞外蛋白酶的消失或誘導(dǎo)表達(dá)有可能是針對不同寄主的毒力相關(guān)因子。菌株在不同培養(yǎng)條件下表達(dá)的胞外蛋白酶活的差異通過對根蟲瘟霉原始菌株R0、轉(zhuǎn)寄主菌株R1和R5在不同培養(yǎng)條件下誘導(dǎo)胞外蛋白酶活差異的比較，發(fā)現(xiàn)在含昆蟲表皮和明膠的培養(yǎng)基中，均能誘導(dǎo)表達(dá)高水平的胞外蛋白酶，說明胞外蛋白酶易受外源蛋白的誘導(dǎo)產(chǎn)生；而在營養(yǎng)極度缺乏的MS培養(yǎng)基中，胞外蛋白酶的表達(dá)水平均很低。有趣的是，在營養(yǎng)豐富的薩氏培養(yǎng)基中，培養(yǎng)5-

3、15天時根蟲瘟霉表達(dá)的胞外蛋白酶活水平也很低，而培養(yǎng)30天有所上升，特別是轉(zhuǎn)寄主菌株R5表現(xiàn)更為明顯，至30天酶活達(dá)到最高峰。該現(xiàn)象表明當(dāng)環(huán)境中易用物過于富余時，菌株不會浪費(fèi)能量去合成暫不需要的酶類。因此，胞外蛋白酶的誘導(dǎo)產(chǎn)生還跟外界營養(yǎng)物的缺乏有關(guān)。 菌株在不同培養(yǎng)條件下誘導(dǎo)表達(dá)的胞外蛋白酶條帶分析37KD的蛋白酶條帶在任何條件下都能被誘導(dǎo)表達(dá)，是各菌株中的保守序列所編碼的胞外蛋白酶。46KD的蛋白酶條帶僅能在含明膠的培養(yǎng)基中

4、被誘導(dǎo)表達(dá)，而葡萄糖可抑制其表達(dá)。在薩氏培養(yǎng)基中，67KD的蛋白酶條帶在轉(zhuǎn)寄主過程中消失了，而46KD和117KD的蛋白酶條帶隨著轉(zhuǎn)寄主傳代數(shù)增加而明顯，表明菌株在轉(zhuǎn)染過程中選擇表達(dá)了對新寄主具有較高基質(zhì)特異性的胞外蛋白酶。從轉(zhuǎn)寄主前后胞外蛋白酶誘導(dǎo)表達(dá)的差異比較，可以推測67KD的胞外蛋白酶可能是針對原始寄主大菜粉蝶的毒力相關(guān)因子，而46KD和117KD的蛋白酶條帶則有可能是針對新寄主小菜蛾的毒力相關(guān)因子。 誘導(dǎo)表達(dá)的胞外蛋白