1、目的:研究RASSF1A基因轉(zhuǎn)染對(duì)肺腺癌細(xì)胞A549生長(zhǎng)的抑制作用及其可能作用機(jī)制.方法:利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)將RASSF1A基因?qū)敕蜗侔┘?xì)胞A549,應(yīng)用Westernblotting鑒定經(jīng)G418篩選后獲得的克隆,建立高表達(dá)RASSF1A基因的肺腺癌A549細(xì)胞株.MTT法測(cè)定RASSF1A基因轉(zhuǎn)染前后A549細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線(xiàn),平板克隆形成實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞周期的改變,觀(guān)察RASSF1A基因轉(zhuǎn)染對(duì)A549細(xì)胞生長(zhǎng)特性的影

2、響.采用Westernblotting分別檢測(cè)RASSF1 A基因轉(zhuǎn)染前后A549細(xì)胞p65在全細(xì)胞以及核內(nèi)的表達(dá);應(yīng)用RT-PCR檢測(cè)p21<'WAF1> mRNA的表達(dá),探討RASSF1A基因的作用機(jī)制.結(jié)果:1、成功建立高表達(dá)RASSF1A基因的肺腺癌A549細(xì)胞株;2、RASSF1A-A549細(xì)胞生長(zhǎng)速度明顯低于A(yíng)549、pcDNA3.0-A549細(xì)胞;RASSF1A-A549細(xì)胞的克隆形成率為13.0％,低于A(yíng)549(18.7

3、％)、pcDNA3.0-A549細(xì)胞(18.3％)(P<0.05);3、與A549、pcDNA3.0-A549細(xì)胞相比,pcDNA3.0-RASSF1A-A549細(xì)胞G1/G0期細(xì)胞百分?jǐn)?shù)明顯增多(90.57％)(P<0.05);4、與A549、pcDNA3.0-A549細(xì)胞相比,RASSF1A-A549細(xì)胞核內(nèi)p65蛋白表達(dá)明顯降低,而全細(xì)胞p65蛋白表達(dá)未見(jiàn)明顯變化;5、與A549、pcDNA3.0-A549細(xì)胞相比,RASSF1A