1、目的:闡述生化湯(Shenghua decoction,SHD)的物質基礎和配伍機理。
　　 方法:按照中醫(yī)組方原則,設計不同缺藥配伍組方,采用藥效學研究不同配伍組方與全方之間差異,采用中藥指紋圖譜技術建立不同配伍組方體內外化學成分譜,并將體內外化學成分譜與藥效學建立聯(lián)系(即譜效關系),闡述生化湯的物質基礎及配伍機理。
　　 第一節(jié)生化湯不同配伍組方之間藥效學的比較
　　 1.按照“君臣佐使”的中醫(yī)組方原理,撤藥

2、分析法制備生化湯各配伍組方的水煎液(各配伍組方水煎液最后均濃縮定容至同一體積,折合含當歸0.56g/ml)。
　　 2.藥效學實驗分組及給藥方式:SD大鼠隨機分為正常組(NS)、模型組(MG)、不同配伍組方的給藥組(S1～S5)。按20 ml/kg的給藥容積灌胃給予各組大鼠相應的生化湯配伍組方水煎液,每天2次,連續(xù)5天。
　　 3.末次給藥40 min后尾靜脈注射10％高分子右旋糖酐(High moleculardext

3、ran,HMD)制作急性血瘀(Acute blood stasis,ABS)模型,20 min后采血,一部分血液用肝素抗凝,檢測血液流變學指標:血漿黏度、紅細胞聚集指數(shù)、血沉方程K值及紅細胞電泳指數(shù);另一部分血液用消炎痛-EDTA.Na2抗凝,分離血漿,放射免疫法測TXB2和6-Keto-PGF1α。
　　 4.末次給藥30 min后腹腔注射縮宮素制成原發(fā)性痛經(Primarydysmenorrhea,PD)模型,觀察30 mi

4、n內扭體次數(shù):然后取血,分離血漿,可見分光光度法測T-SOD活力及MDA含量;取子宮并稱重,計算子宮系數(shù);制備10％子宮組織勻漿,可見分光光度法檢測T-NOS活力、NO和蛋白含量。
　　 第二節(jié):生化湯不同配伍組方之間體外化學成分譜的比較及譜效關系分析
　　 1.甲醇沉淀法處理生化湯各配伍組方水煎液,制成供試品溶液。
　　 2.采用C18色譜柱,甲醇-0.2％甲酸為流動相線性梯度洗脫,流速為1.0ml/min,柱

5、溫30℃,檢測波長270 nm,建立生化湯各配伍組方體外化學成分譜。
　　 3.從整體上考察各缺藥組方與全方之間體外化學成分譜的差異,并結合藥效學的差異,進行譜效關系分析。
　　 第三節(jié):生化湯不同配伍之間體內化學成分譜的比較及譜效關系分析
　　 1.按20 ml/kg的給藥容積灌胃給予大鼠相應生化湯配伍組方的水煎液,每天2次,連續(xù)5天,末次給藥60min后取血制備含藥血漿。
　　 2.甲醇沉淀蛋白法處理

6、各生化湯各配伍組含藥血漿。
　　 3.采用C18色譜柱,以甲醇-0.2％甲酸為流動相線性梯度洗脫,流速為1.0ml/min,柱溫30℃,檢測波長270 nm,建立生化湯不同配伍組方血漿化學成分譜。
　　 4.從整體上考察各缺藥配伍組方與全方之間血漿化學成分譜的差異,并結合藥效學的差異,進行譜效關系分析。
　　 結果:第一節(jié):生化湯不同配伍組方之間藥效學的比較
　　 1.生化湯全方對HMD引起的急性血瘀證,

7、及對縮宮素引起的原發(fā)性痛經證均起到良好的治療作用,且優(yōu)于其它缺藥配伍組方。
　　 2.缺炙甘草組方以及缺炮姜炙甘草組方對大鼠子宮系數(shù)、30 min內扭體次數(shù)、血漿中的MDA、T-SOD等指標的影響與生化湯全方相比均有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)。
　　 3.缺桃仁炮姜炙甘草組方對大鼠子宮系數(shù)、30 min內扭體次數(shù)、MDA、T-SOD、血漿黏度、TXB2及TXB2/6-Keto-PGF1α等指標的影響與生化湯

8、全方相比均有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)。
　　 4.當歸方對大鼠子宮系數(shù)、30 min內扭體次數(shù)、MDA、T-SOD、血漿黏度、TXB2及TXB2/6-Keto-PGF1α紅細胞聚集指數(shù)、紅細胞電泳指數(shù)、血沉方程K值、TNOS和NO等指標的影響與生化湯全方相比均有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)。
　　 第二節(jié):生化湯不同配伍組方之間體外化學成分譜的比較及譜效關系分析
　　 1.隨著藥味的缺

9、失,生化湯各配伍組方與全方的化學成分譜之間的相似度逐漸減小。
　　 2.與生化湯全方相比,缺炙甘草組方體外化學成分譜缺失了17、18、25、26、29號峰;同時5、7、11、16、19、24、30號峰的峰面積有顯著性變化(P＜0.05或P＜0.01)。
　　 3.與生化湯全方相比,缺炮姜炙甘草組方體外化學成分譜缺失了15、17、18、25、26、29號峰:同時7、11、16、19、24、30號峰的峰面積有顯著性變化(P＜

10、0.05或P＜0.01)。
　　 4.與生化湯全方相比,缺桃仁炮姜炙甘草組方體外化學成分譜缺失了15、17、18、25、26、29號峰;同時1、6、7、11、13、14、16、19、24、30號峰的峰面積有顯著性變化(P＜0.05或P＜0.01)。
　　 5.與生化湯全方相比,當歸方的體外化學成分譜缺失了3、10、12、15、17、18、21、22、25、26、27、28、29號峰;同時1、4、6、7、8、9、11、13

11、、14、16、19、20、23、24、30號峰的峰面積有顯著性變化(P＜0.05或P＜0.01)。
　　 第三節(jié):生化湯不同配伍之間體內化學成分譜的比較及譜效關系分析
　　 1.與體外化學成分譜比較,生化湯全方血漿化學成分譜中2、5、7、10、11、14、16、17、18、19、20號峰為直接吸收入血的原型成分;a、b、c、d、e、f、g、h、I、j、k、L號峰可能為原方中化學成分在血漿中的結合物或其代謝產物。
　

12、　 2.與生化湯全方相比,缺炙甘草組方血漿化學成分譜缺失了17、d、e、L號峰;同時7、20、g號峰的峰面積有顯著性變化(P＜0.05或P＜0.01)。
　　 3.與生化湯全方相比,缺炮姜炙甘草組方血漿化學成分譜缺失了17、d、e、L號峰;同時19、20、g號峰的峰面積有顯著性變化(P＜0.05或P＜0.01)。
　　 4.與生化湯全方相比,缺桃仁炮姜炙甘草組方血漿化學成分譜缺失了17、d、e、L號峰:同時5、16、1

13、8、19、20、g號峰的峰面積有顯著性變化(P＜0.05或P＜0.01)。
　　 5.與生化湯全方相比,當歸方血漿化學成分譜缺失了11、17、d、e、f、h、L號峰;同時2、5、7、10、14、16、18、19、20、b、c、g、I、j、k號峰的峰面積有顯著性變化(P＜0.05或P＜0.01)。
　　 結論:生化湯全方的藥效最好,其組方配伍是科學、合理的;全方中29個化學成分可能是生化湯物質基礎的組成部分;生化湯給予大鼠