1、目的：觀察二甲雙胍與放療聯(lián)合應(yīng)用對(duì)人結(jié)直腸癌SW480和HCT116細(xì)胞的增殖凋亡作用，并探討其可能的相關(guān)機(jī)制。
　　方法：1、采用cck-8法檢測(cè)不同濃度的二甲雙胍、不同劑量的X射線及二甲雙胍聯(lián)合X射線對(duì)人結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖的影響。
　　2、應(yīng)用平板克隆形成實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)單用二甲雙胍、單用X射線、二甲雙胍聯(lián)合X射線等不同干預(yù)后人結(jié)直腸癌細(xì)胞的生存及凋亡情況。
　　3、運(yùn)用基因表達(dá)譜芯片技術(shù)分析人結(jié)直腸癌SW480

2、和HC T116細(xì)胞在對(duì)照組、單用二甲雙胍組、單用X射線組、二甲雙胍聯(lián)合X射線組中基因的表達(dá)差異，為后續(xù)的機(jī)制研究提供新的線索。
　　4、采用定量PCR驗(yàn)證基因芯片的分析結(jié)果，同時(shí)檢測(cè)細(xì)胞在不同方式處理后，細(xì)胞中ADORA1、Caspase3、Caspase9、Bcl-2的mRNA表達(dá)情況。
　　5、應(yīng)用Western Blotting檢測(cè)不同方式處理細(xì)胞后相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1、cck-8結(jié)果顯示：不同濃

3、度（1、5、10 mmo l/l）二甲雙胍對(duì)細(xì)胞的增殖有抑制作用，并存在濃度、時(shí)間的依賴關(guān)系；同時(shí)，不同劑量（2、4、6、8、10、12Gy）X射線對(duì)細(xì)胞也有增殖抑制作用，但在8Gy時(shí)對(duì)細(xì)胞的增殖抑制作用最明顯；在二甲雙胍（1mmol/l）與 X射線（8Gy）聯(lián)合實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合組對(duì)細(xì)胞的增殖抑制作用均明顯高于單用組，具有顯著差異（P<0.05）。
　　2、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：二甲雙胍和X射線均能抑制細(xì)胞的生存能力，二甲雙胍

4、（1mmol/l）與 X射線（8Gy）聯(lián)合后對(duì)細(xì)胞生存能力的抑制作用明顯高于單用組，具有顯著差異（P<0.05）。
　　3、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示：二甲雙胍（1mmol/l）與X射線（8Gy）聯(lián)合誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡率明顯高于二者單用時(shí)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。
　　4、基因表達(dá)譜芯片技術(shù)分析結(jié)果示：二甲雙胍（1 mmo l/l）處理SW480和HCT116細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)多個(gè)表達(dá)差異基因，從中選取一個(gè)與凋亡有關(guān)且在二甲雙胍抗腫瘤

5、作用中未曾報(bào)導(dǎo)的基因腺苷A1受體（Ade nos ine A1 Rec eptor）進(jìn)行研究。
　　5、定量PCR結(jié)果顯示：驗(yàn)證了基因芯片的結(jié)果，在二甲雙胍（1mmol/l）與X射線（8Gy）聯(lián)合組ADORA1、Caspase3、Caspase9的mRNA表達(dá)均高于單用組，而Bcl-2的mRNA表達(dá)低于單用組，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。
　　6、Western blotting結(jié)果顯示：與單用二甲雙胍組（1mmol/l

6、）、單用X射線組（8Gy）比較，聯(lián)合組的p-AMPK、ADORA1、Caspase3、Caspase9表達(dá)明顯增加，而p-mTOR和Bcl-2的表達(dá)明顯下降。
　　結(jié)論：1、二甲雙胍與X射線均可抑制人結(jié)直腸癌SW480和HCT116細(xì)胞增殖及生存能力，但二者聯(lián)合的效應(yīng)要明顯強(qiáng)于二者單用。
　　2、二甲雙胍與X射線聯(lián)合促進(jìn)人結(jié)直腸癌SW480和HCT116細(xì)胞凋亡的效果要明顯強(qiáng)于二者單用時(shí)引起的細(xì)胞凋亡。
　　3、二甲雙