1、背景與目的： 乳腺癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，發(fā)病率每年以3％-8％的速度增加，其死亡率已占女性惡性腫瘤首位，世界衛(wèi)生組織將乳腺癌列為威脅女性健康的“頭號(hào)殺手”。與其他惡性腫瘤一樣，乳腺癌同樣具有侵襲與轉(zhuǎn)移的特征。而惡性腫瘤的侵襲性與轉(zhuǎn)移性直接影響到患者的生存與預(yù)后。 腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移的機(jī)制非常復(fù)雜，腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移是個(gè)多階段、多步驟、多因素、多基因的發(fā)展過(guò)程，是腫瘤細(xì)胞與機(jī)體(宿主)雙方相互作用的結(jié)果。20世紀(jì)70

2、年代初,Folkman等就提出“腫瘤的生長(zhǎng)依賴(lài)血管形成”，腫瘤及其轉(zhuǎn)移物的生長(zhǎng)、維持必須有新生血管的形成來(lái)維持，新生的血管網(wǎng)不僅為腫瘤的生長(zhǎng)提供養(yǎng)料及氧氣，運(yùn)走代謝產(chǎn)生的廢物，而且還以旁分泌的形式刺激腫瘤的生長(zhǎng)，并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)，向其它組織器官浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移。如果阻斷新生血管的形成，腫瘤細(xì)胞將趨于壞死。而腫瘤血管生成受到正負(fù)兩方面因子的調(diào)控：血管生成刺激因子和血管生成抑制因子。 中期因子(Midkine,MK)是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的

3、一種重要的血管生成誘導(dǎo)因子，因起初在孕中期小鼠胚胎腎臟發(fā)現(xiàn)其大量表達(dá)而得名。研究表明：MK對(duì)腫瘤新生血管形成具有明顯的調(diào)控作用。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascularendothelialialggrowthfactor,VEGF)是一種重要的促血管生長(zhǎng)因子，在多種正常組織細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中均有表達(dá)，但是其表達(dá)水平卻差異很大。微血管密度(Microvesseldensity,MVD)是衡量血管生成的定量指標(biāo)。CD34是特異性很強(qiáng)的血管內(nèi)皮細(xì)胞

4、標(biāo)記物，目前可用來(lái)檢測(cè)MVD。 本試驗(yàn)通過(guò)免疫組化方法檢測(cè)中期因子(midkine,MK)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascularendothelialialgrowthfactor,VEGF)、CD34在乳腺癌組織的表達(dá)情況并與癌旁正常乳腺組織和乳腺良性腫瘤組進(jìn)行比較，分析MK及VEGF與腫瘤間質(zhì)血管新生的關(guān)系，探討MK、VEGF在乳腺癌組織中的表達(dá)以及在乳腺癌的發(fā)生、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移中的作用及與腫瘤血管生成的關(guān)系及臨床病理學(xué)意義。為乳

5、腺癌的發(fā)生和預(yù)后判斷提供參考依據(jù)。 材料與方法： (1)組織標(biāo)本來(lái)源于我院乳腺中心2001年2月至2002年9月經(jīng)手術(shù)切除，并經(jīng)病理證實(shí)標(biāo)本，術(shù)前均未放療及化療。所有標(biāo)本均經(jīng)10％甲醛固定，常規(guī)脫水后石蠟包埋。共選取66例乳腺癌標(biāo)本、20例距腫瘤5cm以上的切緣正常乳腺組織標(biāo)本及20例乳腺良性腫瘤組織標(biāo)本。 (2)免疫組化SP法(streptavidinperoxidasemethod)檢測(cè)MK、VEGF、CD3

6、4在乳腺癌、癌旁正常乳腺及良性乳腺腫瘤組織中的表達(dá)情況并計(jì)數(shù)MVD。ER、PR為乳腺癌術(shù)后常規(guī)檢查項(xiàng)目。 (3)統(tǒng)計(jì)工具為SPSS12.0版軟件包，統(tǒng)計(jì)方法采用x2檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)、方差分以及spearm等級(jí)相關(guān)分析，Kaplan-Meier方法分析生存率，并經(jīng)Log-rank檢驗(yàn)，以p<0.05作為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的判定標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)果： (1)MK、VEGF蛋白表達(dá)及MVD值在乳腺癌組織、乳腺良性腫瘤組織及癌旁正常乳腺組

7、織中的比較。 MK蛋白在乳腺癌組織中表達(dá)率為72.4％、在癌旁正常乳腺組織中及良性腫瘤組織中表達(dá)率皆為0；VEGF蛋白在乳腺癌組織表達(dá)率68.1％、在正常乳腺組織中及良性腫瘤組織中表達(dá)率分別為15.0％、25％。乳腺癌組MK、VEGF表達(dá)率顯著高于癌旁正常乳腺組及良性腫瘤組(p<0.001)。癌旁正常乳腺組及良性腫瘤組MK、VEGF表達(dá)率比較差異皆無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。 CD34染色呈棕黃色，陽(yáng)性物質(zhì)位于血管內(nèi)皮

8、細(xì)胞胞漿及胞膜。乳腺癌組織中的MVD值為83.97±17.10、癌旁正常乳腺組織中的MVD值為45.75±10.76，乳腺良性腫瘤的MVD值48.32±12.35，三組比較差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.001)。乳腺癌組織中的MVD值顯著高于正常乳腺組織及乳腺良性腫瘤。而癌旁正常乳腺組織和乳腺良性腫瘤比較差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 (2)MK、VEGF蛋白表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系 MK、VEGF蛋白在乳腺癌中的表達(dá)與腫瘤大小

9、，腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況，臨床分期有明顯關(guān)系，而與年齡，組織學(xué)類(lèi)型，組織學(xué)分級(jí)，ER,PR表達(dá)是否陽(yáng)性無(wú)關(guān)。 (3)MK、VEGF蛋白表達(dá)和MVD值的關(guān)系 MK表達(dá)陽(yáng)性組及陰性組MVD均值分別為88.32±17.67、72.39±7.75，MK表達(dá)陽(yáng)性MVD值明顯高于MK表達(dá)陰性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.001)。VEGF表達(dá)陽(yáng)性組及陰性組MVD均值分別為88.62±17.31、74.00±11.79,陽(yáng)性組MVD明顯高于

10、陰性組。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。 乳腺癌組織中MK、VEGF均為陽(yáng)性表達(dá)時(shí)的MVD均值為89.12±16.25，MK陽(yáng)性而VEGF陰性時(shí)的MVD均值為83.51±17.20，MK陰性而VEGF陽(yáng)性時(shí)MVD均值為80.26±15.29，MK、VEGF均為陰性表達(dá)時(shí)的MVD值為69.23±15.57。統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果表明二者共陽(yáng)性表達(dá)時(shí)的MVD均值顯著高于其它各組的MVD值，MK、VEGF均為陰性表達(dá)時(shí)的MVD值最小，差異有統(tǒng)計(jì)

11、學(xué)意義(F＝10.217p=0.026)。 (4)MK、VEGF的表達(dá)的相關(guān)性分析 66例乳腺癌組織中MKVEGF表達(dá)共陽(yáng)性者37例，MK和VEGF表達(dá)共陰性者10例，MK表達(dá)陽(yáng)性而VEGF表達(dá)陰性者11例，MK表達(dá)陰性而VEGF表達(dá)陽(yáng)性者8例，表達(dá)一致率為71.21％(47/66)，Spearman等級(jí)相關(guān)分析表明二者之間表達(dá)呈正相關(guān)(r＝0.312,p=0.011)。 (5)MK、VEGF的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

12、 乳腺癌MK表達(dá)陽(yáng)性組和陰性者組復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率分別為41.6％、11.1％。陽(yáng)性組顯著高于陰性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；VEGF表達(dá)陽(yáng)性組和陰性者組復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率分別為42.2％、14_3％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。MK陽(yáng)性組的無(wú)病生存期和總生存期均比表達(dá)陰性者明顯縮短，差異有顯著性，(分別為X2=5.32,P=0.0211；X2=4.98,P=0.0256)。VEGF的表達(dá)陽(yáng)性的無(wú)病生存期和總生存期亦較表達(dá)陰性者者

13、明顯縮短，差異有顯著性((分別為X2＝5.12，P=0.0236；X2=4.53，P=0.0334)。 結(jié)論： (1)MK、VEGF蛋白在乳腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)顯著高于正常乳腺組織及乳腺良性腫瘤組織，而正常乳腺組織、良性腫瘤組織比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 (2)MK、VEGF表達(dá)水平與乳腺癌的臨床分期、腫瘤大小及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)；與年齡、組織類(lèi)型、病理分級(jí)、ER、PR表達(dá)無(wú)關(guān)。 (3)MK、VEGF與腫瘤新