1、AD5—10是一株新的鼠抗人死亡受體5(death receptor 5，DR5)單克隆抗體，為本實(shí)驗(yàn)室在前期研究中獲得，能夠強(qiáng)烈誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞系發(fā)生凋亡，抑制小鼠體內(nèi)移植瘤的生長，對(duì)人正常肝細(xì)胞和人外周血淋巴細(xì)胞沒有明顯的誘導(dǎo)毒性，已成為研發(fā)生物類藥物的候選者，具有抗腫瘤作用的應(yīng)用前景。但是研究發(fā)現(xiàn)，某些腫瘤細(xì)胞對(duì)AD5—10的誘導(dǎo)卻表現(xiàn)為明顯的抗性，其抗性是否具有一定的表現(xiàn)規(guī)律，其內(nèi)在的調(diào)控機(jī)制又是什么，仍然是目前一個(gè)有待闡明的科

2、學(xué)問題。 本論文擬選用肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、SCLC、H460、H1299和Calu—3，分析細(xì)胞表面DR5表達(dá)水平與細(xì)胞對(duì)AD5—10誘導(dǎo)凋亡敏感性之間的關(guān)系：并進(jìn)一步尋找凋亡相關(guān)調(diào)節(jié)分子，研究其調(diào)節(jié)細(xì)胞對(duì)AD5—10誘導(dǎo)凋亡敏感性的內(nèi)在分子機(jī)制。本研究所選的五株肺癌細(xì)胞中，A549和SCLC細(xì)胞對(duì)AD5—10中度敏感，其他三株細(xì)胞對(duì)AD5—10不太敏感。研究表明，這五株肺癌細(xì)胞對(duì)AD5—10的敏感性與細(xì)胞中DR5的表達(dá)水平無關(guān)

3、。但發(fā)現(xiàn)，使用AD5—10處理，敏感或中度敏感細(xì)胞中，c—FLIPL發(fā)生明顯的切割，c—FLIPL的表達(dá)量顯著下降；而不太敏感或抗性的細(xì)胞中的c—FLIPL的表達(dá)水平?jīng)]有明顯變化。表明c—FLIPL是參與調(diào)節(jié)AD5—10誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵分子。 進(jìn)一步研究證明，c—FLIPL過量表達(dá)可以部分抑制人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞SVT35、人肺癌細(xì)胞A549對(duì)AD5—10的敏感性；而亞毒性濃度的化療藥物環(huán)磷酰胺(CHX)、放線菌素D(Act

4、D)能通過下調(diào)細(xì)胞中c—FLIPL蛋白表達(dá)水平，增強(qiáng)AD5—10對(duì)肺癌細(xì)胞的殺傷活性。此外，通過c—FLIPLsiRNA特異抑制細(xì)胞中的c—FLIPL的表達(dá)，可以顯著增強(qiáng)多種肺癌細(xì)胞對(duì)AD5—10誘導(dǎo)凋亡的敏感性。其調(diào)節(jié)機(jī)制是c—FLIPLsiRNA和AD5—10能激活細(xì)胞中caspase依賴的信號(hào)通路，下調(diào)Bcl—2家族蛋白Bid和Bcl—XL的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)線粒體膜電位的降低以及細(xì)胞色素C的釋放。并且，研究證明c—FLIPLsiRN

5、A和AD5—10聯(lián)合作用對(duì)正常人細(xì)胞沒有毒性。 最后，檢測了人肺癌組織中c—FLIPL的表達(dá)，結(jié)果顯示c—FLIPL特異高水平表達(dá)于人肺癌組織中的腫瘤細(xì)胞中，而在正常組織和腫瘤細(xì)胞周圍間質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)量很低，兩者在統(tǒng)計(jì)學(xué)上具有顯著差異。以上研究提示特異下調(diào)c—FLIPL可能是一種非常有潛力的治療肺癌的策略，特別是針對(duì)那些對(duì)功能性單抗單獨(dú)作用產(chǎn)生抗性的腫瘤病人。 第二部分研究中，本文還利用AD5—10可變區(qū)基因，構(gòu)建了表達(dá)鼠