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文檔簡介
1、背景:針對人DR5受體的特異性單克隆抗體,是近年來被譽為最有前景的抗腫瘤藥物。DR5抗體藥物也即將上市,但是其存在的問題也隨之而來,DR5在人體內(nèi)的分布不同,表達也不同,人們思考怎樣才能最大發(fā)揮其抗癌療效。柚皮素是一種廣泛存在于植物和中藥中的天然黃酮類化合物。有研究顯示發(fā)現(xiàn)其具有多種藥理活性,主要有抗氧化、抗衰老、抗腫瘤、抗動脈粥樣硬化、DNA修復作用等。本研究以HepG2細胞為研究對象,選用柚皮素和本實驗室制備的mDRA-6單抗合用來
2、探討二者聯(lián)合誘導腫瘤細胞凋亡的協(xié)同作用。
目的:探討柚皮素增強抗人DR5單克隆抗體對人肝癌細胞系HepG2的凋亡作用及可能機制。
方法:MTT法檢測柚皮素及抗人DR5單抗對人肝癌細胞系HepG2的生長抑制作用,Annexin V/PI雙染分析細胞凋亡,WB蛋白免疫印記檢測Caspase8的表達,流式細胞術(shù)檢測HepG2細胞表面DR5的表達。
結(jié)果:
1.MTT法檢測結(jié)果表明,10m
3、g/L的mDRA-6作用于HepG2細胞12h,細胞增殖抑制率為39%,10mg/L的mDRA-6分別與200μmol/L、400μmol/L、800μmol/L柚皮素共同作用于HepG2細胞,細胞增殖抑制率分別增加為58%、79%、85%;
2.Annexin V/PI雙染,流式細胞術(shù)檢測結(jié)果表明2 mg/L的mDRA-6作用細胞12h,細胞凋亡率為16.77%,2 mg/L的mDRA-6和400μmol/L柚皮素共同作
4、用于HepG2細胞12h,細胞凋亡率增加為62.66%;
3.免疫印跡技術(shù)檢測顯示,mDRA-6和柚皮素共同作用于HepG2細胞后,蛋白免疫印記顯示Caspase8的激活片段明顯;
4.流式細胞術(shù)檢測HepG2細胞表面DR5的表達,其基礎表達率為42%,400μmol/L柚皮素作用于HepG2細胞12后,HepG2細胞表面DR5的表達率增加為73%。
結(jié)論:柚皮素增強抗人DR5單克隆抗體對人肝癌
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