1、1988年Giguere以雌激素受體DNA結(jié)合域(DBD)的cDNA為探針，采用低嚴謹雜交技術篩選人cDNA文庫得到了一種新的受體，命名為雌激素相關受體(ERRs)。ERRs是一種孤兒核受體，至今尚未鑒定出相應的配體。經(jīng)多年的研究顯示，ERRs在胚胎發(fā)育、真核生物基因表達調(diào)控、細胞的生長與癌變以及骨形成與重塑等方面發(fā)揮重要作用。ERRe參與了骨形成及骨質(zhì)疏松的發(fā)生<'[1]>。 本室在人肺癌細胞A549中利用mammalian

2、two hybrid assay篩選到能夠有效抑制蛋白質(zhì)活性的植物性雌激素單體物質(zhì)，該單體能夠通過ERRot有效的抑制肺癌細胞的生長。因此，為深入研究植物性雌激素通過ERRα對人肺癌細胞的抑制作用，我們檢測了細胞的生長對細胞是否凋亡進行了判斷，并進行了ROS等各項生化指標的測定。利用體外合成的針對ERRα小干擾RNA對人肺癌細胞A549進行轉(zhuǎn)染實驗，并檢測某些基因的表達；利剛慢病毒介導的RNA干擾技術特異性沉默人肺癌細胞A549中ERR

3、α基因的表達，包裝病毒并成功侵染目的細胞，從而進一步分析該基因沉默后對肺癌細胞的影響。 實驗結(jié)果表明，加入我們利用mammalian two hybrid assay篩選出的植物性雌激素單體(濃度為10uM)24小時后，能夠明顯抑制人肺癌細胞A549的生長，細胞表現(xiàn)出凋亡的特征，形態(tài)表現(xiàn)為細胞縮小、核斷裂、質(zhì)膜出芽、凋亡小體形成的細胞死亡。生長曲線顯示細胞增殖明顯受到抑制，48小時后抑制效應達到60％，繼續(xù)觀察發(fā)現(xiàn)細胞幾乎停止生

4、長。對細胞進行ROS的檢測，48小時后與對照組相比加入植物性雌激素單體(濃度為10μM)的ROS升高了2倍。 體外合成的針對ERRα小干擾RNA對人肺癌細胞A549進行轉(zhuǎn)染后，利用real time PCR技術檢測相關基因的表達，PDK4基因表達量一定程度上受劍了抑制。于是建立了慢病毒介導的RNA干擾技術，從而達到沉默目的基因的作用，進而組裝具有沉默功能的病毒，利用病毒侵染肺癌細胞A549檢測基因沉默后對細胞的影響，為以后的研究