1、目的：研究羥基喜樹堿能否通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激誘導口腔鱗癌細胞凋亡。 方法：體外培養(yǎng)人口腔鱗癌細胞株-KB細胞，取處于對數(shù)生長期的細胞進行實驗，不同實驗方法根據(jù)羥基喜樹堿濃度采用不同分組方式。KB細胞經(jīng)羥基喜樹堿處理后，利用MTT試驗檢測羥基喜樹堿的細胞毒性作用，計算羥基喜樹堿對KB細胞的生長抑制率和半抑制濃度(IC50)，并繪制生長抑制曲線。Hoechst 33258染色和流式細胞術分別對細胞凋亡進行定性和定量研究，western b

2、lot檢測細胞凋亡相關蛋白Caspase-3和Bel-2蛋白以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特異蛋白GRP78蛋白的表達情況，免疫熒光細胞化學檢測GRP78蛋白在細胞中的定位和轉(zhuǎn)位情況。數(shù)據(jù)均以x±s表示，利用SPSS10.0進行單因素方差分析。 結果：羥基喜樹堿對KB細胞具有細胞毒性作用，隨羥基喜樹堿濃度的升高毒性作用逐漸增強，24h和48h羥基喜樹堿的 IC50分別為 2.43 μg/ml 和 0.072 μg/ml。Hoechst 33258

3、染色后，對照組細胞核多呈圓形或橢圓形，可見少量核分裂象，實驗組細胞核著色程度不一，可見典型凋亡細胞核型，胞核呈致密固縮或碎塊狀濃染。羥基喜樹堿作用于KB細胞48h后，隨其濃度的升高，各組細胞凋亡率逐漸升高，WesternBlot 結果提示Caspase-3 蛋白和GRP78蛋白表達增高，Bel-2蛋白表達降低，實驗組與對照組相比較均有顯著性差異(P<0.05)。正常情況下，GRP78蛋白表達定位于KB細胞的胞漿，部分區(qū)域濃聚。KB細胞經(jīng)

4、羥基喜樹堿刺激后，GRP78蛋白開始出現(xiàn)胞漿高表達，隨著藥物濃度的升高，逐漸向核周濃聚，最后定位于細胞核。 結論：1、羥基喜樹堿對口腔鱗癌細胞具有細胞毒性，呈劑量依賴關系。2、羥基喜樹堿能誘導口腔鱗癌細胞凋亡。3、羥基喜樹堿誘導口腔鱗癌細胞凋亡過程中Caspase-3 蛋白表達增高、Bcl-2 蛋白表達下降。4、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激參與羥基喜樹堿誘導口腔鱗癌細胞凋亡的過程。5、GRP78蛋白在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激介導細胞凋亡過程中的真正作用有待于進