1、Cetuximab(西妥昔單抗,又稱C225單抗)是用于轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌和頭頸鱗狀細(xì)胞癌治療的抗EGFR單克隆抗體,于2004年被美國(guó)FDA批準(zhǔn)上市(商品名Erbitux(R))。盡管該藥在臨床治療中顯示出良好的療效,但臨床超敏反應(yīng)發(fā)生率很高,主要原因是該抗體作為糖蛋白,寡糖鏈中含有大量的Gal-α(1,3)-Gal(α-Gal)結(jié)構(gòu)。Α-Gal在正常人體蛋白的N糖基化修飾中不存在,人多產(chǎn)生于鼠源細(xì)胞系,可引發(fā)藥物特異性IgE抗體介導(dǎo)的超

2、敏反應(yīng)。本研究中,我們?cè)O(shè)計(jì)不同培養(yǎng)工藝并采用不同于Erbitux(R)的表達(dá)系統(tǒng)(CHO表達(dá)系統(tǒng))成功制備出具有不同糖形結(jié)構(gòu)的抗EGFR基因工程抗體(cMAB009單抗),由于該抗體的聚糖結(jié)構(gòu)中不含有α-Gal,因此不會(huì)引發(fā)藥物特異性IgE抗體介導(dǎo)的超敏反應(yīng),具有較Erbitux(R)單抗更好的臨床安全性。
　　本課題應(yīng)用液相色譜-電噴霧離子化四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)(LC-ESI-Q-Tof),通過(guò)交替高低碰撞能量掃描,源內(nèi)誘導(dǎo)解

3、離及二級(jí)質(zhì)譜的方法分別從完整蛋白亞單位水平,酶解糖肽水平,釋放的寡聚糖水平研究聚糖結(jié)構(gòu),對(duì)比分析CMAB009單抗和Erbitux(R),結(jié)合外切糖苷酶逐級(jí)消化的方法對(duì)兩種蛋白的糖鏈結(jié)構(gòu)作進(jìn)一步確證分析;通過(guò)Ⅰ期人體臨床研究,采用NCICTC標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)CMAB009單抗在人體的臨床耐受性,采用流式競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)受試者血清的血藥濃度后通過(guò)WNL不同模型擬合進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)的分析,采用RECIST標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行初步療效評(píng)價(jià);進(jìn)一步通過(guò)臨床采集的大樣本受試

4、者血清,利用生物薄膜光學(xué)干涉(BL1)和ELISA的方法檢測(cè)并分析CMAB009單抗的免疫原性。
　　分析結(jié)果表明,與Erbitux(R)單抗相比,CMAB009單抗具有相同的氨基酸一級(jí)結(jié)構(gòu),但聚糖中不含有α-Gal,且末端唾液酸主要是人體常見(jiàn)的唾液酸化形式N乙酰神經(jīng)氨酸(NANA)。這與我們?cè)谂R床研究中觀察到較好的耐受性,未觀察到藥物相關(guān)性超敏反應(yīng)相一致。在免疫原性大大降低的同時(shí),CMAB009單抗在體內(nèi)的清除特征符合嵌合抗體在

5、體內(nèi)的代謝規(guī)律,其藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)與Erbitux(R)基本一致。同時(shí),本研究還深入探索分析不同的糖基化結(jié)構(gòu)對(duì)治療性抗體安全性,藥代動(dòng)力學(xué)及生物學(xué)活性的影響,進(jìn)一步揭示了FcRn作為單抗消除旁路途徑所發(fā)揮的作用。
　　本研究證明,通過(guò)改造單抗的糖基化結(jié)構(gòu),在不影響單抗生物活性和清除特征的同時(shí),可有效降低單抗的免疫原性,避免超敏反應(yīng)的發(fā)生,減少臨床不良反應(yīng)的發(fā)生率,有望為潛在的超敏反應(yīng)患者帶來(lái)最大的益處,是一種潛在的安全可耐受的有效靶