番茄果實(shí)蔗糖磷酸合成酶基因的克隆和番茄遺傳轉(zhuǎn)化體系的研究.pdf_第1頁(yè)
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1、本試驗(yàn)通過RT-PCR方法,克隆到了番茄果實(shí)蔗糖磷酸合成酶(SPS)基因全長(zhǎng)cDNA,在GenBank中的登記號(hào)為AY726439。并以自交系T6為材料,對(duì)番茄的遺傳轉(zhuǎn)化體系進(jìn)行了優(yōu)化,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法,將甜瓜果實(shí)反義酸性轉(zhuǎn)化酶基因轉(zhuǎn)化番茄,得到了卡那霉素抗性苗,具體的研究結(jié)果:用異硫氰酸胍-苯酚-氯仿一步法,提取番茄自交系20-19果實(shí)總RNA,與GenBank中登記號(hào)為AB051216的番茄蔗糖磷酸合成酶基因高度同源,核苷酸序列的同

2、源性為98﹪。通過番茄遺傳轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化試驗(yàn),確定番茄自交系T6種子消毒方法為先用酒精處理30秒,再用0.7﹪NaCLO(有效氯含量)處理20分鐘,最佳的愈傷組織誘導(dǎo)及不定芽分化培養(yǎng)基為MS+ZT2.0mg/L+IAA0.5mg/L,最佳的生根壯苗培養(yǎng)基為MS+IAA0.5 mg/L,最適合做轉(zhuǎn)化的外植體為子葉,卡那霉素的最終篩選濃度為50mg/L。采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法,將甜瓜果實(shí)反義酸性轉(zhuǎn)化酶基因轉(zhuǎn)化番茄自交系T6,得到了卡那霉素抗性苗。

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