1、牙周疾病引起的牙周組織缺損常常導致牙齒缺失，嚴重影響咀嚼功能和顏面美容。如何利用再生治療方法獲得牙周新附著，恢復天然牙周組織的解剖結構和支持功能，是國內(nèi)外學者所追求的目標和著力研究的熱點課題。已開展的牙周引導組織再生術、生長因子誘導及釉基質蛋白的局部應用等新的治療方法都取得了前所未有的效果，但尚未達到人類所期望的目標。隨著組織工程學理論和技術飛速發(fā)展，為牙周組織再生研究提供了新的思路。目前用組織工程學方法促進牙周再生已經(jīng)成為這一領域的研

2、究熱點之一。 牙周膜干細胞的研究是牙周再生治療領域一個嶄新的課題，它對認識牙周組織的損傷修復機理、探索新的牙周治療技術具有重要的意義。目前國際上已有人成功分離、培養(yǎng)人牙周膜干細胞，犬及其它動物牙周膜干細胞的相關研究尚未見報道，而犬是牙周病實驗研究最常用的動物模型，它具有與人的同源性較高，與人的牙周結構相似等優(yōu)點，因此本研究擬以犬為研究對象，采用克隆分離培養(yǎng)的方法，分離培養(yǎng)犬的牙周膜干細胞，同時對分離的犬牙周膜干細胞進行初步鑒定，

3、并將其作為種子細胞與篩選的支架材料復合分別植入裸鼠皮下和自體犬的的人工牙周缺損區(qū)，探討牙周組織再生的確切機制，為組織工程方法構建牙周組織提供可靠的理論基礎和種子細胞來源。 本實驗以人牙胚為取材來源，培養(yǎng)并鑒定了人牙囊前體細胞，以其為種子細胞篩選支架材料，建立人牙囊細胞三維立體培養(yǎng)模型，為其作為種子細胞研究牙周組織發(fā)育形成機制的研究增添了新的內(nèi)容。 本研究在成功培養(yǎng)兩種種子細胞即牙周膜干細胞和牙囊細胞的基礎上，優(yōu)選支架材料

4、，并與優(yōu)選的支架材料復合立體培養(yǎng)，通過前體/干細胞的分化潛能，體內(nèi)外構建組織工程化的牙周組織樣結構，體內(nèi)重建牙周組織修復自體犬人工牙周組織缺損，通過組織學觀察、免疫組化染色評價形成的牙周膜牙骨質牙槽骨樣結構，初步探討牙周組織各部分再生的機制及體內(nèi)外構建組織工程化牙周組織的可行性，為牙周病的治療提供新的思路和途徑，為進一步利用組織工程原理實現(xiàn)牙周再生性治療的臨床研究奠定基礎。 主要研究內(nèi)容及結果如下： 第一部分牙周組織工程

5、種子細胞的培養(yǎng)、鑒定 1、犬牙周膜干細胞的分離、培養(yǎng)和初步鑒定 目的：體外分離、培養(yǎng)和鑒定犬牙周膜干細胞。 結論：本研究成功分離培養(yǎng)犬牙周膜干細胞，該細胞具有很強的克隆形成能力和多向分化潛能。 2、人牙囊細胞的分離、培養(yǎng)和鑒定 目的：體外分離、培養(yǎng)和鑒定人牙囊間充質前體細胞，為牙周組織工程研究提供可靠的種子細胞來源。 結論：本研究成功培養(yǎng)了人牙囊細胞；人牙囊細胞可在體外較長時間保持其特性，

6、細胞具有成骨細胞的某些表型特征；人牙囊細胞有望成為牙周組織工程研究的種子細胞。 第二部分牙周組織工程支架材料的優(yōu)選 目的：將體外培養(yǎng)擴增的犬牙周膜干細胞和人牙囊前體細胞作為種子細胞分別與膠原凝膠、凍干膠原膜(膠原類材料)，煅燒骨(陶瓷化骨)，復合類材料(膠原復合煅燒骨，)相復合進行體外培養(yǎng)，采用掃描電鏡和細胞計數(shù)法觀察和比較細胞在各種三維支架中的生長、增值情況。 結論：膠原類材料和陶瓷化骨的復合材料有利于牙周膜干

7、細胞和牙囊細胞的黏附、增殖和分化。 第三部分組織工程化牙周組織結構的體內(nèi)外構建 1、組織工程化牙周膜樣結構的體外構建 目的：建立犬牙周膜干細胞與膠原膜體外三維立體培養(yǎng)模型，為體內(nèi)構建牙周組織提供實驗依據(jù)，探討利用可吸收生物材料凍干膠原膜和牙周膜干細胞在體外構建組織工程化牙周膜的可行性。 結論：利用凍干膠原膜為支架，6PDLSCs為種子細胞，可在體外成功構建組織工程化牙周膜樣結構，為進一步進行動物實驗觀察提

8、供了實驗依據(jù)。 2、組織工程化牙周膜牙骨質樣結構的裸鼠體內(nèi)構建 目的：建立人牙囊細胞、犬牙周膜干細胞體內(nèi)三維立體培養(yǎng)模型。 結論：牙囊細胞、犬牙周膜干細胞均可形成牙周膜牙骨質樣結構，可作為種子細胞構建組織工程牙周組織和進行牙周組織修復和再生機制研究。 3、組織工程方法體內(nèi)重建牙周組織的實驗研究 目的：以犬自體牙周膜干細胞為種子細胞，凍干膠原膜、膠原凝膠煅燒骨為支架，復合后植入自體犬的人工牙周缺損處