1、鼻咽癌是在東南亞地區(qū)和我國南部廣泛流行的一種惡性腫瘤，本研究采用蛋白質(zhì)組學(xué)的研究手段對(duì)鼻咽癌細(xì)胞系作了一系列的研究，共分為三個(gè)部分： 第一部分，采用了雙向電泳，PDQuest軟件分析和基質(zhì)輔助激光解析串聯(lián)質(zhì)譜的技術(shù)路線，分析了鼻咽癌細(xì)胞系和正常的鼻咽上皮細(xì)胞系之間的蛋白質(zhì)組學(xué)的差異。共鑒定了15個(gè)在腫瘤細(xì)胞中上調(diào)和18個(gè)在腫瘤細(xì)胞表達(dá)下調(diào)的蛋白質(zhì)，并對(duì)其中的兩個(gè)蛋白質(zhì)annexinAl和nm23H1進(jìn)行了免疫印跡的驗(yàn)證。這些表達(dá)

2、差異的蛋白質(zhì)與細(xì)胞的增殖和調(diào)亡、癌癥的轉(zhuǎn)移，細(xì)胞骨架，信號(hào)傳導(dǎo)等有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果為研究鼻咽癌的癌癥發(fā)生機(jī)理的研究提供了幫助。 第二部分，以鼻咽癌細(xì)胞系HNE1質(zhì)膜為研究對(duì)象，分成三部分研究細(xì)胞表面蛋白質(zhì)： (1) 通過0.1M Na<,2>CO<,3>、水和生物素處理細(xì)胞表面富集到細(xì)胞外周蛋白質(zhì)，(2) 通過Percoll密度梯度超速離心得到全質(zhì)膜，(3) 對(duì)細(xì)胞勻漿液用0.1M Na<,2>CO<,3>溶液處理后再進(jìn)行P

3、ercoll密度梯度超速離心得到整合質(zhì)膜蛋白質(zhì)。對(duì)這三種方法提取的細(xì)胞表面蛋白質(zhì)通過一維SDS-PAGE結(jié)合電噴霧四極桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜(ESI-Q-TOF)，雙向凝膠電泳分離結(jié)合基質(zhì)輔助激光解析飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜(MALDI-TOF-TOF)，以及“shotgun”等多種技術(shù)路線進(jìn)行分離和鑒定，一共鑒定了848個(gè)非冗余蛋白質(zhì)。通過生物信息學(xué)手段，對(duì)鑒定的結(jié)果進(jìn)行了功能分類，并且繪制鑒定結(jié)果的蛋白質(zhì)相互作用關(guān)系圖。另外，對(duì)鑒定到的蛋白質(zhì)中

4、的Galectin-1，nm23，Keratin 8，HSP-70，VCP進(jìn)行了免疫細(xì)胞學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)這些在前人研究中定位在胞漿和核上的蛋白質(zhì)，同樣也定位在細(xì)胞膜上。 第三部分，對(duì)不同分化程度的鼻咽癌細(xì)胞系CNE1和CNE2的細(xì)胞質(zhì)膜進(jìn)行了差異蛋白質(zhì)組的分析。通過Percoll密度梯度離心，用Western Dot分析，取富集了細(xì)胞質(zhì)膜的一層，用丙酮沉淀后再裂解得到蛋白質(zhì)。采取2DE的方法對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行分離鑒定。對(duì)2DE的圖譜進(jìn)行了