1、目的：
　　 前期的體外細胞實驗以及體內(nèi)動物植入實驗表明:中科院金屬研究所利用“高分子熱解結(jié)合可控熔滲反應(yīng)燒結(jié)技術(shù)”制備的泡沫碳化硅具備成為骨缺損修復(fù)材料的基本條件。本實驗通過觀察研究泡沫碳化硅對取自大鼠胎鼠顱骨的原代成骨細胞的增殖和分化的影響,進一步探討泡沫碳化硅作為骨缺損修復(fù)材料的可行性。
　　 方法：
　　 1、實驗組為泡沫碳化硅(Silicon carbide,SiC),對照組為多孔羥基磷灰石(Hydro

2、xyapatite,HA)。
　　 2、大鼠胎鼠顱骨成骨細胞的原代培養(yǎng)與鑒定。
　　 3、掃描電鏡觀察兩種材料表面原代成骨細胞的貼壁生長狀況。
　　 4、 MTT比色法檢測兩種材料上活細胞的數(shù)量和功能狀態(tài),分析兩種材料對原代成骨細胞的毒性。
　　 5、流式細胞儀檢測兩種材料上原代成骨細胞的細胞周期各階段的狀況,計算細胞增殖指數(shù),分析兩種材料對細胞增殖的影響。
　　 6、檢測兩種材料上原代成骨細胞的

3、堿性磷酸酶含量,分析兩種材料對細胞分化的影響。
　　 7、實時熒光定量PCR技術(shù)檢測兩種材料上原代成骨細胞的骨鈣素和核心結(jié)合因子a1的mRNA,分析兩種材料對細胞分化的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1、原代成骨細胞培養(yǎng):相差顯微鏡下可見,培養(yǎng)5d的原代成骨細胞以不規(guī)則形、長梭形、三角形為主,相鄰細胞彼此貼靠,細胞內(nèi)及表面開始出現(xiàn)黑色點狀分泌物,部分區(qū)域出現(xiàn)重疊生長以及輻射生長的現(xiàn)象。經(jīng)堿性磷酸酶染色,成骨細胞的細胞

4、質(zhì)呈深藍色;茜素紅將細胞間分泌的鈣結(jié)節(jié)染成紅色;Ⅰ型膠原免疫熒光染色,細胞質(zhì)染色發(fā)出紅光,細胞核用DAPI染色后發(fā)出藍光。
　　 2、掃描電鏡結(jié)果:原代成骨細胞在兩種材料表面伸展良好,細胞在材料表面伸出很多偽足,表明細胞易于粘附材料表面,并且在材料表面可見明顯的細胞外基質(zhì)沉積,說明材料有良好的生物相容性。
　　 3、 MTT結(jié)果:兩組材料上細胞的MTT值從1、3、5、7d隨觀察時間逐漸升高。在1、3、5d,HA高于SiC

5、,差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義。在7d,SiC快速上升,高于HA,兩者之間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義。這說明泡沫碳化硅很穩(wěn)定,并且沒有隨時間延長而出現(xiàn)細胞毒性。
　　 4、流式細胞儀檢測細胞周期:在1、3、5、7d檢測PI值,1、3、5d兩組材料的PI值逐漸升高,高峰出現(xiàn)在第5d;7d時下降,兩組材料在各個時間點的PI值均接近,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。這表明成骨細胞在SiC上的增殖情況與HA相似。
　　 5、ALP結(jié)果:兩組材料上細胞的ALP含

6、量從1、3、5、7d隨觀察時間逐漸升高。在1d時,HA高于SiC,在3、5、7d,HA低于SiC,但是兩組之間的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。這表明SiC對成骨細胞的分化有促進作用。
　　 6、實時定量PCR結(jié)果:OCN的mRNA結(jié)果:1、5、10d SiC組隨時間延長逐漸增高;HA組最高峰在5d,10d下降但高于1d;1d和5d HA組顯著高于SiC組,10d二者無統(tǒng)計學(xué)差別。Cbfa1的mRNA結(jié)果:1、5、10d SiC組和HA組的