1、目的:葡萄膜黑色素瘤是一種成人最常見的原發(fā)性眼內惡性腫瘤，主要來源于葡萄膜黑色素細胞，因其血運豐富，主要經血行轉移，而且特異性轉移到肝臟，轉移是主要的致死因素，尤其葡萄膜黑色素瘤的轉移往往具有隱匿性，即在腫瘤早期就容易出現(xiàn)臨床影像學無法診斷發(fā)現(xiàn)的微轉移灶。因而目前對葡萄膜黑色素瘤研究的熱點是確立轉移潛能的預后標志，尋找可以早期準確客觀預判葡萄膜黑色素瘤患者預后的生物標記物。legumain是一個新發(fā)現(xiàn)的半胱氨酸蛋白酶，其特點：在腫瘤組織

2、中特異性表達，正常組織中無明顯表達，與腫瘤免疫關系密切，而且與腫瘤生成，侵襲，轉移，擴散密切相關。本研究旨在明確legumain在葡萄膜黑色素瘤中的表達，探討legumain對葡萄膜黑色素瘤患者預后的影響，及其與影響葡萄膜黑色素瘤患者預后各因素（病理類型，腫瘤體積，轉移情況，視神經受累，侵潤程度）的關系。
　　 方法:本研究首先選取兩株葡萄膜黑色素瘤細胞株Mum-2B和Mum-2C，進行細胞培養(yǎng)傳代，提取RNA和蛋白質，進行RT

3、-PCR和Western-blot檢測，同時利用兩株細胞系進行細胞免疫熒光的染色，從而在基因和蛋白水平明確legumain在葡萄膜黑色素瘤細胞系的表達。在這個實驗基礎上，進而收集82例葡萄膜黑色素瘤患者的臨床及預后資料，同時將這些患者保存的石蠟標本制作組織切片，進行l(wèi)egumain免疫組織化學染色，統(tǒng)計legumain的表達情況，運用Kaplan-meier單因素生存分析的原理與方法進行統(tǒng)計分析，將legumain的表達情況作為待檢驗的

4、預后因素，與患者預后結果相聯(lián)系，并運用Log-rank、Beelow、Tatone-Ware三種方法進行顯著性檢驗，明確legumain對葡萄膜黑色素瘤患者預后的影響，同時對82例葡萄膜黑色素瘤的臨床預后資料進行Kaplan-meier單因素生存分析，并運用Log-rank、Brelow、Tarone-ware三種方法進行顯著性檢驗，篩選出與葡萄膜黑色素瘤患者預后相關的因素，然后將legumain免疫組化結果分別與葡萄膜黑色素瘤患者預后

5、相關的各因素進行相關分析，明確legumain與影響葡萄膜黑色素瘤預后各相關因素的關系。
　　 結果:在細胞實驗中，通過RT-PCR的檢測，表明在基因水平上兩株葡萄膜黑色素瘤細胞系legumain為高表達，從細胞免疫熒光也可見legumain在兩株葡萄膜黑色素瘤細胞系細胞膜呈現(xiàn)為綠色熒光的高表達，利用western-blot技術對兩株細胞系進行l(wèi)egumain的蛋白檢測，可見legumain在兩株細胞系中均為高表達，且在Mum-

6、2B中表達較高。對82例葡萄膜黑色素瘤患者的石蠟病理切片進行免疫組化染色，結果顯示在葡萄膜黑色素瘤的三種基本病理類型（上皮細胞型，梭形細胞型，混合細胞型）中l(wèi)egumain均有陽性（高表達）和陰性（低表達）的表達。通過Kaplan-meier單因素生存分析和Log-rank、Brelow、Tarone-Ware三種方法進行顯著性檢驗，發(fā)現(xiàn)葡萄膜黑色素瘤患者性別的不同對患者預后無明顯影響（P>0.05），其余因素legumain，病理類型

7、，腫瘤體積，轉移情況，視神經受累，侵潤程度均對葡萄膜黑色素瘤患者的預后有顯著性的影響（P<0.05）。經過雙變量的相關分析，legumain與影響葡萄膜黑色素瘤患者預后的各因素（病理類型，腫瘤體積，轉移情況，侵襲視神經，侵潤程度）均呈正相關（P<0.01），而且與腫瘤侵潤程度關系密切（相關系數(shù)大于0.5）。
　　 結論:本研究通過對葡萄膜黑色素瘤細胞系和石蠟包埋病理標本進行l(wèi)egumain表達情況的檢測，發(fā)現(xiàn)legumain在葡

8、萄膜黑色素瘤中有明顯的高表達，然后結合患者臨床及預后資料進行葡萄膜黑色素瘤的預后研究和相關分析，明確legumain與葡萄膜黑色素瘤預后及影響預后各因素的關系，發(fā)現(xiàn)legumain不但與葡萄膜黑色素瘤患者預后有關，而且與影響葡萄膜黑色素瘤患者預后的各因素有一定的相關性，從而說明legumain不僅是判斷葡萄膜黑色素瘤患者預后的一個重要指標，而且在葡萄膜黑色素瘤的發(fā)生發(fā)展過程中可能起著重要作用，legumain也有可能成為葡萄膜黑色素瘤治