1、目的：從體內(nèi)外分別研究阿司匹林增加動(dòng)脈粥樣斑塊穩(wěn)定性作用及其可能的分子機(jī)制，并觀察其發(fā)揮作用的最佳劑量。 方法：體內(nèi)實(shí)驗(yàn)采用雄性新西蘭兔高脂飲食加腹主動(dòng)脈內(nèi)膜剝脫術(shù)制成高脂性動(dòng)脈粥樣硬化模型，然后分別給予阿司匹林5-20mg/kg治療4周，實(shí)驗(yàn)?zāi)┱T發(fā)斑塊破裂，運(yùn)用圖像分析方法觀察阿司匹林對(duì)粥樣斑塊破裂處血栓形成面積的影響；利用光鏡觀察破裂斑塊的形態(tài)學(xué)特征；用比濁法檢測(cè)血小板聚集性；用免疫組化方法測(cè)定巨噬細(xì)胞的蛋白表達(dá)；原位雜交方

2、法分別測(cè)定COX-2mRNA和MMP-2mRNA表達(dá)。 體外實(shí)驗(yàn)采用人單核細(xì)胞THP-1細(xì)胞株，用RPMI1640培養(yǎng)基適應(yīng)性培養(yǎng)后，利用佛波酯促使其分化為巨噬細(xì)胞后，分別用含阿司匹林12.5-200μg/ml的培養(yǎng)基孵育24h，用ELISA法分別測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清液中MMP-2、MMP-9、PGE2和PGD2含量；用RT-PCR法分別檢測(cè)細(xì)胞中MMP-2、MMP-9、PPARα、PPARγ、COX-1、COX-2、mPGES-1

3、和L-PGDSmRNA表達(dá)；用Westernblot法分別測(cè)定PPARα、PPARγ、NF-κB、mPGES-1和L-PGDS蛋白表達(dá)。 結(jié)果： (1)阿司匹林5mg/kg和10mg/kg組可以抑制粥樣斑塊破裂處血栓的形成，且5mg/kg組的作用更明顯。 (2)阿司匹林可以抑制斑塊中泡沫細(xì)胞的形成和聚集，使纖維帽尤其是肩部區(qū)的結(jié)構(gòu)保持得較為完整。 (3)阿司匹林5mg/kg和10mg/kg組對(duì)ADP或AA

4、誘導(dǎo)的血小板聚集均有較好的抑制作用，當(dāng)劑量增加至20mg/kg時(shí)，阿司匹林對(duì)血小板的聚集抑制作用反而減弱。 (4)阿司匹林5mg/kg和10mg/kg組可明顯減少斑塊內(nèi)巨噬細(xì)胞數(shù)目；阿司匹林也能降低斑塊中COX-2mRNA的表達(dá)，且隨著劑量的增加作用增強(qiáng)，在10-20 mg/kg組的作用較為明顯；還能明顯降低粥樣斑塊中MMP-2 mRNA表達(dá)，但以阿司匹林5mg/kg組的作用較好。 (5)阿司匹林可抑制THP-1源性巨噬

5、細(xì)胞分泌MMP-2和MMP-9，并且降低MMP-2和MMP-9 mRNA表達(dá)。 (6)阿司匹林可以通過增加PPARα和PPARγ mRNA和蛋白表達(dá)，來抑制NF-κB的蛋白表達(dá)。預(yù)先給予PPARα或/和PPARγ拮抗劑后能減弱阿司匹林抑制巨噬細(xì)胞源性MMP-9mRNA表達(dá)和釋放作用，相反PPARα和PPARγ激動(dòng)劑能抑制MMP-9的表達(dá)和釋放。 (7)阿司匹林還可以通過抑制COX-1和COX-2 mRNA表達(dá)，抑制mPG

6、ES-1mRNA和蛋白表達(dá)，從而抑制PGE2的釋放而減少PGE2依賴性的MMPs表達(dá)。同時(shí)阿司匹林亦能增加L-PGDSmRNA和蛋白表達(dá)，從而增加PGD2釋放，PGD2的代謝產(chǎn)物15d-PGJ2，能抑制MMP-9的表達(dá)和釋放。 (8)上述這些體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果均以阿司匹林50μg/ml的濃度較好。 結(jié)論：阿司匹林具有穩(wěn)定動(dòng)脈粥樣斑塊作用，其機(jī)制可能與減少斑塊區(qū)巨噬細(xì)胞數(shù)量，以及降低粥樣斑塊中MMPs表達(dá)有關(guān)，尤其是阿司匹林可能