1、馬鈴薯是全球第四大糧食作物，亦是一種重要的高產經濟作物。隨著馬鈴薯加工產業(yè)（炸片、炸條）的迅猛發(fā)展，加工型馬鈴薯品種的需求量逐年遞增。為了防止馬鈴薯塊莖在收獲后的發(fā)芽、縮水、病蟲害和腐爛等，往往將塊莖進行低溫儲藏（低于10℃），但是這種方法會導致馬鈴薯塊莖中的淀粉降解，還原糖含量急劇上升，這一現象被稱之為“低溫糖化”。在油炸加工過程中，還原糖與氮化合物的僅氨基酸會發(fā)生“美拉德反應”，生成“類黑蛋白素”，使薯片色澤變暗，味道變苦，令消費者

2、難以接受。而有些馬鈴薯野生種卻表現出耐低溫糖化的特性?，F今關于低溫糖化現象的生理生化機制并不十分清楚，與耐低溫糖化相關的基因及其表達調控研究亦十分有限。本研究以耐低溫糖化的野生種（S．berthaultii）和不耐低溫糖化的栽培品種“鄂馬鈴薯1號”為材料，通過構建差減文庫的方法，篩選出與耐低溫糖化相關的基因，為揭示馬鈴薯塊莖耐低溫糖化機理奠定基礎。取得的主要研究結果如下： 1．通過改進前人的變性液配方，配合本實驗室的抽提方法，建

3、立了一個改良的適用于多淀粉塊莖、塊根組織RNA抽提的方法。本方法結合了鹽酸胍和尿素兩種變性劑，加上高濃度的p-巰基乙醇，有效解決了內源RNase造成的總RNA降解以及多酚氧化污染的問題。高濃度的變性劑和樣品凍溶后迅速加入的苯酚／氯仿／異戊醇，抑制了馬鈴薯塊莖中淀粉的吸水膨脹作用，總RNA初步沉淀后用DEPC處理的水重新溶解再進行蛋白質的分離，更加有效的去除了蛋白質和變性液的污染。與以前的抽提方法比較，本方法經濟、簡單、有效，提取的總RN

4、A可用于后續(xù)的各種分子生物學操作。 2．采用抑制差減雜交技術（SSH），構建了以野生種材料（CW2-1）分別在4℃（Tester）和20℃（Driverl）條件下處理5d的表達基因差減文庫（CW）；以CW2-1（Tester）和E1（Driver2）為材料，在4℃條件下處理5d的表達基因差異文庫（CE）。CW文庫庫容為1468個克隆，CE文庫為1372個克隆。 3．應用反向Northern技術對文庫進行了初步篩選，雜交信

5、號利用凝膠分析軟件“Gel-Pro Analyzer 3.1”進行結果分析，根據表達信號強弱，從文庫CW中挑選了表達強度大于5倍的53個克隆，文庫CE中挑選了表達強度大于3倍的40個克隆進行測序與分析，經GenBank中同源性檢索分析后，分別得到了29和31個基因的EST片段。生物信息比對結果顯示，半數左右的片段為未知功能基因，在文庫CW和CE分別占57％和49％。已知功能的序列在分析的EST中包括代謝相關、抗逆相關、轉錄相關、信號傳導

6、、能量代謝和蛋白合成。 4．采用RT-PCR途徑，對3-磷酸甘油醛脫氫酶、腺苷甲硫氨酸脫羧酶、延伸因子1-alpha、14-3-3蛋白、硫氧還蛋白和磷酸甘油酸變位酶等6個基因進行了分析，結果顯示，3-磷酸甘油醛、腺苷甲硫氨酸脫羧酶、磷酸甘油酸變位酶和硫氧還蛋白在CW2-1塊莖4℃儲藏后的表達強度高于該材料20℃儲藏和“鄂馬鈴薯1號”塊莖4℃儲藏；14-3-3蛋白在CW2-1塊莖中無論在4℃儲藏還是20℃儲藏均高于“鄂馬鈴薯1號”