1、目的：本實(shí)驗(yàn)通過復(fù)制Marmarou's大鼠閉合性顱腦損傷模型，采用組織芯片技術(shù)結(jié)合免疫組化染色，研究閉合性顱腦損傷后單核細(xì)胞趨化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein,MCP-1)及其高親和性受體CCR2在腦組織中的表達(dá)部位、時(shí)序特點(diǎn)及相互關(guān)系，以期為閉合性顱腦損傷的干預(yù)治療提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：選用雄性SD大鼠，體重350g-400g。根據(jù)隨機(jī)化原則分為正常對(duì)照組、手術(shù)對(duì)照組和腦損傷

2、后1h組、2h組、4h組、8h組、12h組、24h組、48h組、72h組和5d組。 復(fù)制Marmarou's大鼠落體打擊損傷模型。分別于腦損傷后不同時(shí)間進(jìn)行4％多聚甲醛灌注固定、取材。蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin，HE)和棓花青(Einarson)尼氏體染色法觀察腦損傷病理改變。用組織芯片儀制作組織芯片，免疫組化SP法檢測(cè)大腦皮質(zhì)、海馬和腦干神經(jīng)細(xì)胞MCP-1和受體CCR2的表達(dá)情況。采用Mias2000圖像

3、分析系統(tǒng)采集并計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，全部數(shù)據(jù)均采用SPSS11.5 for windows分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。 結(jié)果： 1.病理學(xué)改變： 損傷組肉眼觀察可見腦組織水腫、蛛網(wǎng)膜下腔出血及腦挫傷，并累及腦底、腦干。組織學(xué)改變主要表現(xiàn)為：部分神經(jīng)細(xì)胞胞體固縮、深染、拉長(zhǎng)或呈三角形；部分神經(jīng)細(xì)胞胞體腫脹，胞漿變空，核淡染，核膜及核仁完整。部分腦干神經(jīng)纖維增粗或呈波浪樣變。 2.MCP-1免疫組織化學(xué)染色結(jié)果對(duì)照組皮質(zhì)、海馬

4、、腦干部位均有少量免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)。陽(yáng)性物質(zhì)呈棕黃色，定位于細(xì)胞核。 損傷組皮質(zhì)、海馬、腦干部位MCP-1的免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目增多，免疫陽(yáng)性物質(zhì)增加，膠質(zhì)細(xì)胞呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。主要位于項(xiàng)葉皮質(zhì)受擊部位，海馬CA3、CA4區(qū)及齒狀回的陽(yáng)性表達(dá)明顯，腦干免疫反應(yīng)呈陽(yáng)性的神經(jīng)細(xì)胞和膠質(zhì)細(xì)胞亦顯著增加。 頂葉皮質(zhì)MCP-1免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)于損傷后2h表達(dá)開始增多，至12h達(dá)峰值，然后逐漸降低。與對(duì)照組比較，損傷組2h-24

5、h組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，損傷后48h組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，損傷后1h,72h和5d組與對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 海馬MCP-1免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)于損傷后2h表達(dá)開始增多，至12h達(dá)峰值，然后逐漸降低。與對(duì)照組比較，損傷組2h-48h組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，損傷后1h,72h和5d組與對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 腦干MCP-1免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)于損傷

6、后2h表達(dá)開始增多，至12h達(dá)峰值，然后逐漸降低。與對(duì)照組比較，損傷組2h-24h組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，損傷后48h組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，1h,72h和5d組與對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 3.CCR2免疫組織化學(xué)染色結(jié)果對(duì)照組皮質(zhì)、海馬、腦干部位均有少量免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)。陽(yáng)性物質(zhì)棕黃色，定位于細(xì)胞核。 損傷組皮質(zhì)、海馬、腦干部位CCR2的免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目增多，免疫陽(yáng)性物質(zhì)

7、增加，膠質(zhì)細(xì)胞呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。主要位于頂葉皮質(zhì)受擊部位，海馬以CA3、CA4區(qū)及齒狀回表達(dá)明顯，腦干免疫反應(yīng)陽(yáng)性的神經(jīng)細(xì)胞和膠質(zhì)細(xì)胞亦顯著增加。 頂葉皮質(zhì)CCR2免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)于損傷后4h表達(dá)開始增多，至24h達(dá)峰值，然后逐漸降低。與對(duì)照組比較，損傷組4h-72h組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，損傷后1h,2h和5d組與對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 海馬CCR2免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)于損傷后4h表達(dá)開始

8、增多，至24h達(dá)峰值，然后逐漸降低。與對(duì)照組比較，損傷組4h-72h組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，損傷后1h,2h和5d組與對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 腦干CCR2免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)于損傷后4h表達(dá)開始增多，至24h達(dá)峰值，然后逐漸降低。與對(duì)照組比較，損傷后4h組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，損傷組8h-72h組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。損傷后1h,2h和5d組與對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.

9、05)。 結(jié)論： 1.正常時(shí)皮質(zhì)、海馬和腦干部位均有少量MCP-1免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)。腦損傷后皮質(zhì)、海馬和腦干部位的MCP-1免疫反應(yīng)陽(yáng)性表達(dá)增強(qiáng)，免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目增多，損傷后2h皮質(zhì)、海馬和腦干部位的MCP-1表達(dá)開始增強(qiáng)，12h達(dá)峰值，然后逐漸降低，72h基本回落至正常水平。 2.正常時(shí)皮質(zhì)、海馬和腦干部位均有少量CCR2免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)。腦損傷后皮質(zhì)、海馬和腦干部位的CCR2表達(dá)增強(qiáng)，免疫反應(yīng)陽(yáng)性