淫羊藿多糖的分離純化和結(jié)構(gòu)鑒定及生物活性研究.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、淫羊藿為小檗科(Berberidacea)淫羊藿屬(Epimedium)多年生草本植物的統(tǒng)稱(chēng),其莖葉可入藥,辛溫?zé)o毒,為中國(guó)傳統(tǒng)補(bǔ)益中藥,具有補(bǔ)腎壯陽(yáng),祛風(fēng)除濕,治療陽(yáng)痿,腰膝無(wú)力,四肢不仁,半身不遂等藥效?,F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明,淫羊藿主要活性成分是黃酮類(lèi)和多糖,具有廣闊而顯著的藥用價(jià)值,對(duì)心腦血管和腫瘤等重大疾病療效顯著。
  目前淫羊藿屬植物的研究和開(kāi)發(fā)多局限于黃酮類(lèi)物質(zhì),其中總黃酮和淫羊藿苷含量是判斷淫羊藿藥材質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn),而對(duì)

2、淫羊藿多糖的研究則相對(duì)滯后。研究表明植物多糖生物活性廣泛,且毒副作用較小,具有廣闊的開(kāi)發(fā)前景。粗毛淫羊藿(Epimedium acuminatum Franch.)因總黃酮和淫羊藿苷的含量較低而未被收錄于《中國(guó)藥典》,但其分布廣泛,生物量較高,在四川等許多地方也被當(dāng)做藥材使用,具有較大的開(kāi)發(fā)潛力。本研究以粗毛淫羊藿為對(duì)象,分別采用傳統(tǒng)熱水浸提法、超聲波輔助提取法、酶提法和微波輔助提取法四種常規(guī)方法提取淫羊藿多糖,探討提取方法對(duì)淫羊藿多糖

3、理化性質(zhì)和生物活性的影響,并對(duì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)化,旨在提高淫羊藿多糖的提取率、降低提取能耗,最后對(duì)淫羊藿多糖進(jìn)行分級(jí)純化,研究其構(gòu)效關(guān)系,為粗毛淫羊藿多糖的開(kāi)發(fā)利用提供理論基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下:
  1.分別采用熱水法、超聲波法、酶法和微波法提取淫羊藿多糖,多糖提取液經(jīng)乙醚和丙酮洗滌、Sevage法和半透膜透析除去蛋白質(zhì)和小分子雜質(zhì),濃縮干燥后得熱水提粗多糖、超聲波提粗多糖、酶提粗多糖和微波法提粗多糖。
  2.采用化學(xué)成分分析

4、、紅外光譜分析和電鏡掃描對(duì)四種粗多糖理化性質(zhì)進(jìn)行研究。結(jié)果表明四種粗多糖的化學(xué)成分一致,主要官能團(tuán)沒(méi)有差異,均存在結(jié)合蛋白,但末端糖苷鍵構(gòu)型不同,熱水提、酶提和微波輔助提粗多糖均為β-糖苷鍵,而超聲波輔助提粗多糖為α-糖苷鍵。掃描電鏡顯示熱水提粗多糖和酶提粗多糖表面平整光滑,超聲波提粗多糖和微波提粗多糖表面粗糙,凹凸不平且伴有空洞。抗氧化評(píng)價(jià)結(jié)果表明,熱水提粗多糖清除DPPH自由基和ABTS自由基能力、還原能力、抑制紅細(xì)胞溶血能力顯著高

5、于另外三種粗多糖。
  3.對(duì)熱水浸提法提取淫羊藿多糖工藝進(jìn)行響應(yīng)面法優(yōu)化,采用三因素三水平的中心組和設(shè)計(jì),分別進(jìn)行20組試驗(yàn),以多糖得率為響應(yīng)值,建立影響多糖得率的二次多項(xiàng)式數(shù)學(xué)模型。根據(jù)模型,確定了熱水浸提法提取淫羊藿多糖的最佳工藝條件為:料液比為29.61 mL/g、提取溫度為85.67℃以及提取時(shí)間3.57 h,實(shí)際得率為8.21%。
  4.對(duì)淫羊藿多糖組分進(jìn)行了分離和結(jié)構(gòu)鑒定。通過(guò)酒精梯度分級(jí)、陰離子交換層析和凝

6、膠滲透層析將淫羊藿粗多糖分成極性不同、帶電荷量不同以及相對(duì)分子量不同的三個(gè)純化多糖片段:EAP-40-1、EAP-60-1和EAP-80-2。三個(gè)多糖片段的主要化學(xué)成分和官能團(tuán)沒(méi)有區(qū)別,但相對(duì)分子量大小和單糖組成不同,EAP-40-1的相對(duì)分子量為138kD,主要由葡萄糖和半乳糖組成;EAP-60-1的相對(duì)分子量為114kD,主要含葡萄糖和甘露糖;EAP-80-2的相對(duì)分子量為65kD,主要單糖組成為半乳糖。
  5.采用DPPH

7、法、ABTS法、鐵離子還原能力、羥基自由基清除試驗(yàn)、紅細(xì)胞溶血抑制試驗(yàn)和脂質(zhì)過(guò)氧化抑制試驗(yàn),對(duì)三種淫羊藿純化多糖片段的抗氧化能力進(jìn)行比較。結(jié)果表明三種多糖片段均具有一定的抗氧化能力,且量效關(guān)系良好。其中EAP-40-1具有最高的DPPH自由基清除能力、羥基自由基清除能力和鐵離子還原能力,而EAP-60-1的ABTS自由基能力清除能力、抑制紅細(xì)胞溶血能力和抑制膜脂過(guò)氧化能力顯著高于另外兩種多糖片段。EAP-80-2抗氧化能力較低,且沒(méi)有明

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