沙蔥多糖的分離、純化和結(jié)構(gòu)鑒定及其生物學(xué)活性的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、沙蔥(Allium mongolicum Regel)是內(nèi)蒙古草原生長量大且為羊喜食的牧草。天然植物多糖具有抗菌、抗病毒、增強免疫力和促進動物生長等作用,是確保飼料和動物性食品安全以及人體健康的理想添加劑。論文通過四部分內(nèi)容研究了沙蔥多糖的提取、純化和結(jié)構(gòu),結(jié)合體內(nèi)和體外試驗對沙蔥多糖的生物學(xué)活性進行了較為系統(tǒng)的研究,并從分子水平初步探討了其免疫調(diào)節(jié)機制。為開發(fā)沙蔥資源和綠色、安全的動物免疫佐劑或飼料添加劑提供理論和科學(xué)依據(jù)。
 

2、  第一部分沙蔥多糖的提取、純化和結(jié)構(gòu)鑒定。
   采用熱水浸提法提取了沙蔥多糖,優(yōu)化了沙蔥多糖活性炭脫色的工藝。研究了活性炭添加量、脫色時間和脫色溫度對沙蔥多糖脫色效果的影響,通過正交試驗確定了沙蔥多糖活性炭脫色的最佳工藝參數(shù),即脫色溫度80℃,活性炭添加量1.0%,吸附時間40min,在此條件下,脫色率為93.25%,多糖損失率為18.79%。
   對脫色后的沙蔥多糖進行SephadexG-100柱層析純化并測定

3、其分子量,采用紫外光譜、紙層析、比旋光度法和凝膠柱層析法檢驗純度;硅膠薄層層析(TLC)、高效液相色譜(HPLC)鑒定單糖組成,紅外光譜(IR)和核磁共振(NMR)進行結(jié)構(gòu)解析。結(jié)果表明,純化后的沙蔥多糖(SCSP)是一種白色疏松、易溶于水、分子量為5.89x10~4D的均一組分中性多糖,是由L-Rha、D-Glc、D-Gal三種吡喃糖構(gòu)成的雜多糖,糖鏈的主要連接方式為α-Glc(1→4)、[α-Glc(1→)4)-]n和端基α-Rha

4、。
   第二部分SCSP的體外抑菌試驗。
   采用瓊脂擴散法比較了沙蔥多糖(SCSP)、沙蔥鮮汁及黃芪多糖(HQSP)在體外對大腸桿菌、痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、假單胞綠膿桿菌、變形桿菌的抑菌作用。結(jié)果表明,20 mg/mL和40 mg/mL的SCSP對以上6種細菌均有一定的抑制作用,尤其對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌效果較為明顯,最大抑菌圈直徑分別為13.3mm、9.9mm;HQSP對以上細菌均無任

5、何抑制作用;沙蔥鮮汁的抑菌效果更為顯著,對6種細菌均有較強的抑制作用,抑菌圈直徑均≥8mm,尤其對腸道細菌痢疾桿菌的抑菌效果最為顯著,最大抑菌圈直徑為21.2mm。
   第三部分 SCSP的抗腫瘤作用。
   體外采用MTT法,研究了不同濃度的SCSP對S180、L1210、YAC-1、K562和A5495種細胞株的抑制作用;通過體內(nèi)飼養(yǎng)試驗研究了SCSP對S180腹水瘤小鼠腫瘤的抑制作用和免疫調(diào)節(jié)作用。結(jié)果表明,SC

6、SP高、中劑量組對S180、YAC-1、K562細胞株均有顯著抑制作用(P<0.05),SCSP各劑量組對L1210和A549細胞株無顯著抑制作用(P>0.05);高、中、低三個劑量組的SCSP均能夠改善S180腹水瘤小鼠的生存狀態(tài),提高其生存質(zhì)量,抑制腹水的形成,延長存活期,此外,還可以提高小鼠的胸腺、脾臟指數(shù)及血清IL-2、TNF-α和IFN-γ的含量,尤其以高劑量組的作用效果最為顯著(P<0.05)。
   第四部分 SC

7、SP對正常小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用及機理。
   研究飼喂SCSP對正常小鼠各項免疫指標(biāo)和免疫細胞分泌細胞因子及基因表達的影響。結(jié)果表明,1.25 mg/mL的SCSP能顯著提高正常小鼠的免疫器官指數(shù)(P<0.05),12.5 mg/mL的SCSP可顯著提高小鼠血清IgM、IgG的含量(P<0.05);100~200 μg/mL的SCSP作用72 h,能顯著促進小鼠脾淋巴細胞的增殖(P<0.05),50~150 μg/mL的SCSP作

8、用72 h,可顯著增強小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬功能(P<0.05),50~200 μg/mL的SCSP能顯著提高小鼠NK細胞對YAC-1的殺傷作用(P<0.05),但SCSP各劑量組對正常小鼠骨髓細胞和胸腺淋巴細胞的增殖無顯著影響(P>0.05);100、150μg/mL的SCSP能顯著增強ConA對正常小鼠脾淋巴細胞分泌IL-2的誘導(dǎo)作用及LPS對正常小鼠腹腔巨噬細胞分泌TNF-α的誘導(dǎo)作用(P<0.05);經(jīng)RT-PCR技術(shù)分析,這兩

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