1、 目的：探索細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(Extracellular signal-regulated kinase,ERK)基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞( Bone marrow derived stroma cell,BMSCs)移植是否比單純BMSCs移植對(duì)缺血性腦卒中有更好的神經(jīng)保護(hù)作用。方法：構(gòu)建ERK1/2重組質(zhì)粒并轉(zhuǎn)染BMSCs,建立過表達(dá)ERK1/2的BMSCs(ERK1/2/BMSCs),通過對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物手術(shù)制 備 大 鼠 短 暫

2、 性 大 腦 中 動(dòng) 脈 阻 塞 (Middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,并隨機(jī)分為空載體轉(zhuǎn)染的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植組即BV/BMSCs組、ERK1/2基因修飾骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植組即ERK1/2/BMSCs 組和不移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞組即Control組,再灌注3d時(shí)通過腦立體定位分別移植空病毒轉(zhuǎn)染的BMSCs(BV/BMSCs)、ERK1/2基因轉(zhuǎn)染的BMSCs(ERK1/2/BMSCs)

3、和給予生理鹽水。細(xì)胞移植1周、2周時(shí)處死大鼠,用神經(jīng)功能缺失評(píng)分(Modified Neurological Severity Score,mNSS)評(píng)估不同組缺血性腦卒中大鼠術(shù)后神經(jīng)功能變化、TTC染色評(píng)估ERK1/2/BMSCs組、BV/BMSCs和Control組三組大鼠腦梗死體積改變情況、HE染色觀察各實(shí)驗(yàn)組腦組織病理學(xué)變化；尼氏染色計(jì)數(shù)ERK1/2基因修飾BMSCs移植組、空病毒轉(zhuǎn)染的BMSCs移植組和移植生理鹽水組缺血周邊額

4、頂葉皮質(zhì)的神經(jīng)元數(shù)目；熒光顯微鏡下觀察移植ERK1/2/BMSCs組和BV/BMSCsBMSCs組宿主腦內(nèi)存活數(shù)量,免疫熒光染色顯示膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidicprotein,GFAP)在三組MCAO大鼠腦缺血周邊區(qū)的表達(dá)情況。結(jié)果：1. RT-PCR 和western blot 檢測顯示ERK1/2/BMSCs細(xì)胞系過表達(dá)ERK1/2。2. 與Control組相比, ERK1/2/BMSCs組和BV

5、/BMSCs組的mNSS評(píng)分在1W和2W時(shí)均明顯降低 (P<0.05),而且ERK1/2/BMSCs組比BV/BMSCs組的的mNSS評(píng)分更低(P<0.01)。3.ERK1/2/BMSCs組和BV/BMSCs組的大鼠腦梗塞體積比Control組顯著減少(P<0.05),但ERK1/2/BMSCs組和 BV/BMSCs組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。4. 尼氏染色結(jié)果顯示,1W時(shí)ERK1/2/BMSCs組缺血周邊區(qū)神經(jīng)元數(shù)量顯著多

6、于BV/BMSCs組和Control組( P <0.05 )；14d時(shí)ERK1/2/BMSCs組和BV/BMSCs組缺血周邊區(qū)神經(jīng)元數(shù)量多于Control組(P<0.05),且ERK1/2/BMSCs組的神經(jīng)元數(shù)量顯著多于BV/BMSCs組( P< 0.05 )。5. ERK1/2/BMSCs組在2w時(shí)移植細(xì)胞存活數(shù)比BV/BMSCs組多(P<0.05),但在1W時(shí)兩組之間無明顯差異(P>0.05)。6.ERK1/2/BMSCs 組和B

7、V/BMSCs組的缺血區(qū)周圍GFAP陽性細(xì)胞數(shù)高于Control組(P<0.05)；ERK1/2/BMSCs組又高于BV/BMSCs組(P<0.05)。結(jié)論：1、本實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建了穩(wěn)定表達(dá)ERK1/2的BMSCs,移植ERK1/2基因修飾的BMSCs較單純移植BV/BMSCs更有利于改善MACO大鼠神經(jīng)缺失癥狀,促進(jìn)其運(yùn)動(dòng)和感覺功能恢復(fù)。2、ERK1/2/BMSCs和BMSCs移植治療缺血性腦卒中均能減少腦梗死體積,改善組織病理學(xué)變化。3