1、豬苓多糖(Polyporus polysaccharides,PPS)是中藥多孔菌科真菌豬苓中提取的物質(zhì),已有研究表明,其能提高機體免疫力,具有抗腫瘤作用。樹突狀細胞(Dendritic cell,DC)是目前已知功能最強大的專職抗原提呈細胞(Antigen presenting cell,APC),參與抗原的攝取、加工與提呈,是機體初次免疫應答的始動者,在機體抗腫瘤免疫調(diào)節(jié)中起重要作用。其膜表面高表達MHC分子及多種共刺激分子和黏附分

2、子,有效激活初始T細胞;它能有效呈遞抗原到MHCⅠ和Ⅱ分子上,在相同微環(huán)境中使輔助性T細胞或殺傷性T細胞成簇,有助于細胞毒性T淋巴細胞反應(Cytotoxic T Lymphocyte,CTL)。以往有研究表明腫瘤患者機體中DC功能低下;腫瘤微環(huán)境中浸潤性樹突狀細胞數(shù)量與腫瘤患者預后成正相關,瘤組織中DC浸潤多則預后好。研究中藥抗腫瘤免疫學機制是否參與影響機體DC細胞增殖、成熟、表型及功能改變,為近年來中藥抗腫瘤免疫學探索提供了新的思路

3、。
　　目的：本實驗通過觀察豬苓多糖對荷H22肝癌小鼠骨髓來源DC的增殖、分化發(fā)育、表面標志、抗原提呈功能的影響及對荷瘤小鼠的免疫作用,探討豬苓多糖的抗腫瘤效應,為進一步闡明豬苓多糖的免疫學活性提供依據(jù)。
　　實驗方法：1.制備荷H22肝癌小鼠。2.體外干預對DC的影響:昆明小鼠右腋下荷瘤,喂養(yǎng)10d后拉頸處死,無菌取骨髓細胞,應用rmGM-CSF和rmIL-4體外誘導骨髓細胞生成DC,同時培養(yǎng)液中加入不同濃度豬苓多糖(1μ

4、g/ml,5μg/ml,10μg/ml)使其與DC共培養(yǎng),并設生理鹽水(normal saline,NS)對照組,于第5d加凍融抗原沖擊,培養(yǎng)至第8 d收集各組DC。通過倒置顯微鏡觀察DC的形態(tài)變化;應用流式細胞儀檢測技術檢測其表面標志CD11a、CD86表達情況;用MTT法檢測DC激活的T細胞對H22肝癌細胞的殺傷效應。按上述方法無菌取荷瘤小鼠骨髓細胞,應用rmGM-CSF和rmIL-4體外誘導骨髓細胞生成DC,同時培養(yǎng)液中加入不同濃

5、度豬苓多糖(1μg/ml,5μg/ml,10gg/ml)使其與DC共培養(yǎng),設生理鹽水對照組,第5d不加凍融抗原,培養(yǎng)8d檢測DC增殖周期。3.豬苓多糖體內(nèi)干預對荷瘤小鼠的影響:昆明小鼠右腋下荷瘤,24h后應用不同濃度的豬苓多糖(20μg、200μg、2000μg)左下腹腔注射,并設生理鹽水對照組,連續(xù)注藥10d后于第11d拉頸處死各組小鼠,分別計算其脾指數(shù)和胸腺指數(shù),觀察豬苓多糖對免疫功能的影響;通過測定腫瘤抑制率觀察其抗腫瘤效應。采用

6、統(tǒng)計軟件包SPSS10.0進行統(tǒng)計學分析,結(jié)果用(?)±s表示,多個樣本均數(shù)之間采用單因素方差分析(One-way analysis of variance,One-way ANOVA),顯著性水準為p<0.05。
　　實驗結(jié)果：1.本實驗應用荷瘤小鼠骨髓來源的DC,體外培養(yǎng)加入豬苓多糖。經(jīng)凍融抗原沖擊后,DC表面分子CD86、CD11a表達增高(加藥組與生理鹽水對照組相比,差異有顯著性,p<0.05);DC誘導的CTL對H22肝

7、癌細胞殺傷活性增加(加藥組與生理鹽水對照組相比,差異有顯著性,p<0.05)。未經(jīng)凍融抗原沖擊的DC其增殖周期有所增高(加藥組與生理鹽水對照組相比,差異有顯著性,p<0.05)。2.豬苓多糖組體內(nèi)干預能夠增加荷H22肝癌小鼠脾指數(shù),與生理鹽水對照組相比,p<0.05;而其增加荷H22肝癌小鼠胸腺指數(shù)效果不明顯,與生理鹽水對照組比較,p>0.05。此外,豬苓多糖組能夠提高荷H22肝癌小鼠抑瘤率,抑制腫瘤的生長,與生理鹽水對照組相比差異有統(tǒng)