1、風(fēng)濕熱以及風(fēng)濕性心臟病（風(fēng)心?。┰谌澜绶秶鷥?nèi)仍然是危害人類健康的嚴(yán)重疾病。風(fēng)心病的發(fā)病機(jī)制未明，傳統(tǒng)理論認(rèn)為和A型溶血性鏈球菌的感染和宿主自身免疫反應(yīng)有關(guān)。風(fēng)濕性病變的發(fā)生部位主要在心臟瓣膜、心肌、關(guān)節(jié)等ECM成份承受機(jī)械力最大最頻繁的部位，特別是風(fēng)心病瓣膜病變的發(fā)生和承擔(dān)的壓力高低密切相關(guān)。Tenascin-C（TN-C）是細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）重塑的一組重要分子，且是迄今為止能夠證實(shí)的由機(jī)械信號(hào)直接調(diào)控的最重要分子之一。因此，本課題

2、擬研究和機(jī)械力ECM損傷密切相關(guān)的TN-C在風(fēng)心病瓣膜中的表達(dá)和調(diào)控。
　　目的：判斷TN-C在風(fēng)濕性瓣膜病（RHVD）患者血清中的分布。建立體外瓣膜間質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)體系。并通過壓力培養(yǎng)細(xì)胞裝置研究風(fēng)心病間質(zhì)細(xì)胞在機(jī)械力作用下TN-C表達(dá)的改變，從瓣膜對(duì)機(jī)械力損傷修復(fù)這一新的角度研究風(fēng)濕性心臟瓣膜病的發(fā)病機(jī)制。從而對(duì)預(yù)防和阻止風(fēng)濕性疾病對(duì)瓣膜的進(jìn)行性損害提供一種新的思路，同時(shí)由于深入了對(duì)瓣膜ECM和細(xì)胞相互作用的理解，對(duì)構(gòu)建有修復(fù)功能

3、的組織工程生物心臟瓣膜有重要意義。
　　方法：收集正常對(duì)照和RHVD以及瓣膜畸形患者血清，以夾心ELISA方法測(cè)定IFN-γ、TNF-α以及TN-C水平；無菌手術(shù)獲取主動(dòng)脈瓣，剝除內(nèi)皮層，膠原酶消化分離間質(zhì)細(xì)胞，體外培養(yǎng)；共聚焦染色α-平滑肌actin鑒定細(xì)胞；流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞膜表面IFN-γ和TNF-α受體分布；構(gòu)建產(chǎn)生等雙軸周期性壓力裝置；利用細(xì)胞因子和機(jī)械力作用細(xì)胞后，以實(shí)時(shí)定量RT-PCR鑒定TN-C的表達(dá)；加入不同蛋白

4、激酶阻斷劑，分析參與細(xì)胞因子和機(jī)械力誘導(dǎo)TN-C的信號(hào)傳導(dǎo)途徑。
　　結(jié)果：RHVD患者中，IFN-γ、TNF-α以及TN-C水平明顯高于正常對(duì)照及瓣膜畸形患者；成功建立瓣膜間質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)體系，并鑒定其主要為肌成纖維細(xì)胞；流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示RHVD瓣膜間質(zhì)細(xì)胞表面分布的IFN-γ和TNF-α受體密度較高，而且這種表達(dá)是血清依賴性的；成功構(gòu)建雙軸周期性壓力裝置；IFN-γ、TNF-α的阻斷性抗體能夠降低TN-C的轉(zhuǎn)錄，用不同的蛋白激酶

5、抑制劑，我們發(fā)現(xiàn)機(jī)械力、TNF-α、IFN-γ通過RHoA/ROCK途徑誘導(dǎo)TN-C的轉(zhuǎn)錄。同時(shí)，p38MAPK也參加了IFN-γ和TNF-α誘發(fā)TNC的表達(dá)。此外，TNF-α也通過PKC和ERK途徑誘發(fā)TN-C的表達(dá)。
　　結(jié)論：1.TN-C能作為RHVD血清活性生物標(biāo)志物；2.風(fēng)濕熱能夠改變瓣膜間質(zhì)細(xì)胞表型；3.非風(fēng)濕性瓣膜間質(zhì)細(xì)胞少量組成性表達(dá)TN-C。在風(fēng)濕性瓣膜炎的發(fā)病過程中，Th1樣細(xì)胞因子IFN-γ,TNF-α和機(jī)械