1、目的:構(gòu)建TGF-β3和TGF-β1基因,觀察其對大鼠肝星狀細胞(HSC-T6)的MMP-2、MMP-9及TIMP-1表達的影響。
　　方法:1.基因的合成:構(gòu)建TGF-β3表達質(zhì)粒(pcDNA3.1(+)-TGF-β3)和TGF-β1表達質(zhì)粒(pcDNA3.1(+)-TGF-β1)。2.瞬時轉(zhuǎn)染的表達:通過脂質(zhì)體介導的方法,將pcDNA3.1(+)-TGF-β3和pcDNA3.1(+)-TGF-β1分別及共同轉(zhuǎn)染 HSC-T6細

2、胞,熒光定量PCR法和Western blot法檢測轉(zhuǎn)染后24h、48h、72h、MMP-2、MMP-9、TIMP-1 mRNA和蛋白的表達。3.穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的表達:pcDNA3.1(+)-TGF-β1轉(zhuǎn)染HSC-T6細胞,經(jīng)G418篩選建立高表達TGF-β1的HSC-T6細胞克隆,pcDNA3.1(+)-TGF-β3轉(zhuǎn)染細胞克隆,熒光定量PCR法和Western blot法檢測轉(zhuǎn)染后48h MMP-2、MMP-9、TIMP-1 mRNA和

3、蛋白的表達。
　　結(jié)果:1.pcDNA3.1(+)-TGF-β1轉(zhuǎn)染細胞后MMP-2和TIMP-1 mRNA及蛋白的表達較空白組及對照組明顯增高(P<0.05);MMP-9mRNA及蛋白的表達與空白組及對照組相比無明顯差異(P>0.05)。pcDNA3.1(+)-TGF-β3轉(zhuǎn)染細胞后MMP-2、MMP-9 mRNA及蛋白的表達和TIMP-1 mRNA的表達與空白組及對照組相比無明顯差異(P>0.05),但TIMP-1蛋白表達較空

4、白組及對照組明顯增高(P<0.05)。共轉(zhuǎn)染組MMP-2 mRNA及蛋白表達較空白組和對照組明顯增加(P<0.05);MMP-9 mRNA及蛋白的表達無明顯改變(P>0.05);TIMP-1mRNA及蛋白的表達較 TGF-β1轉(zhuǎn)染組明顯下降(P<0.05)。2.pcDNA3.1(+)-TGF-β3轉(zhuǎn)染克隆細胞后,MMP-2mRNA及蛋白表達與克隆組相比無明顯差異(P>0.05);MMP-9mRNA及蛋白表達較克隆組明顯增加(P<0.05

5、);TIMP-1mRNA及蛋白表達較克隆組明顯下降(P<0.05)。
　　結(jié)論:TGF-β1單獨轉(zhuǎn)染HSC-T6細胞后,MMP-2和TIMP-1表達增加;TGF-β3單獨轉(zhuǎn)染細胞后,MMPS無明顯變化,TIMP-1蛋白表達增加;TGF-β3與TGF-β1共轉(zhuǎn)染細胞可增加MMP-2和抑制TIMP-1表達;TGF-β3轉(zhuǎn)染克隆組細胞可增加MMP-9和抑制TIMP-1的表達。提示重組的TGF-β3基因可能通過促進MMP-2或MMP-9的