1、腎間質(zhì)炎癥反應(yīng)是導(dǎo)致腎間質(zhì)纖維化的重要因素，在腎臟病進(jìn)展過(guò)程中發(fā)揮著非常重要的作用。研究表明，包括白介素-8（interleukin-8, IL-8）和單核細(xì)胞趨化蛋白-1（monocyte chemotactic protein-1, MCP-1）在內(nèi)的趨化因子與腎間質(zhì)炎癥損傷有關(guān)。在糖尿病大鼠和5/6腎切除大鼠模型中，腎間質(zhì)IL-8和 MCP-1表達(dá)顯著增加。腎臟固有細(xì)胞之一--腎小管上皮細(xì)胞，在結(jié)構(gòu)上與小管液和腎間質(zhì)緊密接觸, 研

2、究顯示在細(xì)胞因子及刺激物作用下通過(guò)分泌趨化因子而積極參與腎間質(zhì)病變，被認(rèn)為是腎間質(zhì)趨化因子的主要來(lái)源之一。HK-2細(xì)胞是人近端腎小管上皮細(xì)胞系，保留了腎小管上皮細(xì)胞的基本形態(tài)和生物學(xué)特性。過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ（γ，PPARγ）是一類(lèi)配體依賴性核轉(zhuǎn)錄因子超家族成員之一，15-脫氧前列腺素J2（J2, 15d-PGJ2）和羅格列酮（RGL）分別是PPARγ的天然激動(dòng)劑和人工合成激動(dòng)劑。近年來(lái)，在糖尿病腎病和非糖尿病腎病動(dòng)物模型中均發(fā)

3、現(xiàn)PPARγ激動(dòng)劑可減輕腎間質(zhì)炎癥反應(yīng)，延緩腎間質(zhì)纖維化過(guò)程。PPARγ激動(dòng)劑減輕腎間質(zhì)炎癥反應(yīng)是否與抑制腎小管上皮細(xì)胞分泌趨化因子有關(guān)及進(jìn)一步分子機(jī)制尚未探明。脂多糖(LPS)是一種重要的致炎因子，可導(dǎo)致內(nèi)毒素血癥，加快狼瘡性腎炎和IgA腎病動(dòng)物模型的腎臟損害。
　　 本研究以腎小管上皮細(xì)胞（HK-2細(xì)胞）為研究對(duì)象，觀察15d-PGJ2對(duì)LPS誘導(dǎo)的趨化因子表達(dá)的影響。結(jié)果提示：與對(duì)照組相比，單獨(dú)LPS刺激4h使IL-8和M

4、CP-1mRNA分別升高（5.27±1.83）和(5.04±1.33)倍。與單獨(dú)LPS組相比，15d-PGJ2+LPS組IL-8和MCP-1mRNA分別下降74.23％和79.42％；腎間質(zhì)炎癥反應(yīng)是導(dǎo)致腎間質(zhì)纖維化的重要因素，在腎臟病進(jìn)展過(guò)程中發(fā)揮著非常重要的作用。研究表明，包括白介素-8（IL-8）和單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）在內(nèi)的趨化因子與腎間質(zhì)炎癥損傷有關(guān)。在糖尿病大鼠和5/6腎切除大鼠模型中，腎間質(zhì)IL-8和 MCP-

5、1表達(dá)顯著增加。腎臟固有細(xì)胞之一--腎小管上皮細(xì)胞，在結(jié)構(gòu)上與小管液和腎間質(zhì)緊密接觸, 研究顯示在細(xì)胞因子及刺激物作用下通過(guò)分泌趨化因子而積極參與腎間質(zhì)病變，被認(rèn)為是腎間質(zhì)趨化因子的主要來(lái)源之一。HK-2細(xì)胞是人近端腎小管上皮細(xì)胞系，保留了腎小管上皮細(xì)胞的基本形態(tài)和生物學(xué)特性。過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ（γ，PPARγ）是一類(lèi)配體依賴性核轉(zhuǎn)錄因子超家族成員之一，15-脫氧前列腺素J2（J2, 15d-PGJ2）和羅格列酮（RGL）分別

6、是PPARγ的天然激動(dòng)劑和人工合成激動(dòng)劑。近年來(lái)，在糖尿病腎病和非糖尿病腎病動(dòng)物模型中均發(fā)現(xiàn)PPARγ激動(dòng)劑可減輕腎間質(zhì)炎癥反應(yīng)，延緩腎間質(zhì)纖維化過(guò)程。PPARγ激動(dòng)劑減輕腎間質(zhì)炎癥反應(yīng)是否與抑制腎小管上皮細(xì)胞分泌趨化因子有關(guān)及進(jìn)一步分子機(jī)制尚未探明。以往研究已顯示，15d-PGJ2可抑制TNF-α誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞/單核細(xì)胞分泌誘導(dǎo)性一氧化氮合酶（iNOS）和白介素-6（Interleukin -6，IL-6）等炎癥介質(zhì)，這一作用是否依賴于

7、PPARΓ研究較少。為了進(jìn)一步研究15d-PGJ2對(duì)腎小管上皮細(xì)胞分泌趨化因子的影響是否依賴于PPARΓ，本研究第二部分用RNAi技術(shù)沉默HK-2細(xì)胞中PPARΓ表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：在PPARΓ沉默的HK-2細(xì)胞中，PPARΓ蛋白表達(dá)量是正常HK-2細(xì)胞的27.74％， 15d-PGJ2預(yù)處理2h仍能顯著抑制LPS所致的IL-8和MCP-1表達(dá)增加，與單獨(dú)LPS組相比， 細(xì)胞中IL-8 和MCP-1mRNA分別下降59.21％和44.0

8、8％；培養(yǎng)上清中IL-8和MCP-1分別下降47.11％和39.40％（均p<0.05）。研究發(fā)現(xiàn)15d-PGJ2可顯著抑制LPS誘導(dǎo)的IκB磷酸化和NF-κB核易位，且此抑制作用不依賴于PPARΓ。表明15d-PGJ2作用于HK-2細(xì)胞，可直接抑制LPS誘導(dǎo)的IκB磷酸化，減少I(mǎi)κB的泛素化降解，進(jìn)而抑制NF-κB核易位，減少下游IL-8和MCP-1轉(zhuǎn)錄，且以上作用不依賴于核受體PPARγ。本研究還發(fā)現(xiàn)RGL的抗炎機(jī)制與15d-PGJ

9、2不同：在PPARγ沉默的HK-2細(xì)胞中，與單獨(dú)LPS組相比，RGL+LPS組 IL-8 mRNA和蛋白僅分別下降18.16％和11.39％，MCP-1mRNA和蛋白僅分別下降16.83％和11.86％，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。且RGL對(duì)LPS誘導(dǎo)的IκB磷酸化和NF-κB核易位無(wú)明顯影響。NCoR（nuclear receptor corepressor）屬于核受體輔抑制因子，與PPARγ結(jié)合抑制其轉(zhuǎn)錄活性。本研究第三部分用特異性siRN

10、A沉默腎小管上皮細(xì)胞NCoR，觀察NCoR對(duì)RGL抑制趨化因子表達(dá)的影響。結(jié)果顯示在NCoR沉默的HK-2細(xì)胞中，與對(duì)照組相比，單獨(dú)LPS 組IL-8和MCP-1表達(dá)均顯著增加（p<0.001）；與單獨(dú)LPS刺激相比，RGL+LPS組IL-8 mRNA和蛋白僅分別下降32.22％和19.33％，MCP-1 mRNA和蛋白分別僅分別下降11.83％和10.77％，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示沉默NCoR可抵消RGL對(duì)趨化因子表達(dá)的抑制作用。以往

11、研究表明NCoR/HDAC3復(fù)合體從NF-κB的DNA結(jié)合位點(diǎn)解離對(duì)于激活NF-κB靶基因轉(zhuǎn)錄是必需的。研究表明肝X受體(LXRs)和糖皮質(zhì)激素受體(GR) SUMO化(SUMO)，可抑制NCoR被19S蛋白酶體降解，進(jìn)而抑制NCoR/HDAC3復(fù)合體從NF-κB靶基因啟動(dòng)子區(qū)清除，發(fā)揮抗炎作用。本研究表明，RGL顯著降低NF-κB DNA結(jié)合活性，且可顯著抑制LPS誘導(dǎo)的NCoR降解。提示RGL抑制趨化因子表達(dá)的作用依賴于NCoR，即

12、RGL激活 PPARγ后抑制NCoR的降解，使NCoR/HDAC3復(fù)合體穩(wěn)定結(jié)合于NF-κB的DNA結(jié)合位點(diǎn)，進(jìn)而阻斷NF-κB介導(dǎo)的炎癥因子轉(zhuǎn)錄。PPARγ分子結(jié)構(gòu)也存在SUMO化位點(diǎn)，在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活子（STAT1）的抑制蛋白1(PIAS1)作用下發(fā)生SUMO化。為進(jìn)一步觀察RGL抑制趨化因子表達(dá)的作用是否與PPARγ SUMO化有關(guān)，本研究用特異性siRNA沉默HK-2細(xì)胞PIAS1表達(dá)。結(jié)果顯示，在PIAS1沉默的HK-2細(xì)

13、胞中，與對(duì)照組相比，單獨(dú)LPS組IL-8和MCP-1表達(dá)均顯著增加；與單獨(dú)LPS刺激相比，RGL+LPS組IL-8mRNA和蛋白水平僅分別下降27.41％和13.33％，MCP-1 mRNA和蛋白僅分別下降20.16％和7.7％，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?？梢?jiàn)阻斷PPARγ SUMO化， RGL的抗炎作用明顯被抑制，提示RGL的抗炎機(jī)制與LXRs和GR相似，即RGL激活PPARγ SUMO化，抑制NCoR被蛋白酶體降解，使NCoR穩(wěn)定結(jié)合于NF

14、-κB 的DNA結(jié)合位點(diǎn)，抑制下游炎癥因子轉(zhuǎn)錄。
　　 本研究首次證實(shí)PPARγ激動(dòng)劑可顯著抑制LPS誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞分泌IL-8和MCP-1。PPARγ天然激動(dòng)劑--15d-PGJ2可直接抑制LPS誘導(dǎo)的IκB磷酸化，進(jìn)而阻斷NF-κB核易位，以上作用不依賴于PPARγ。與15d-PGJ2不同，PPARγ人工合成激動(dòng)劑--RGL對(duì)趨化因子的抑制作用依賴于PPARγ，對(duì)NF-κB核易位無(wú)明顯影響，而是通過(guò)激活PPARγ，促進(jìn)其