1、目的：
　　觀察 miR-494在脂多糖（LPS）誘導人腎小管上皮細胞（HK-2）中的表達變化，并進一步探討miR-494對HK-2細胞凋亡的調控作用及其機制。
　　方法：
　　1、體外培養(yǎng)HK-2，給予1 ug/ml LPS分別干預0 h、1 h、3 h、6 h、12 h。采用Real-time PCR檢測miR-494的表達變化。
　　2、構建miR-494慢病毒過表達及陰性對照載體，轉染HK-2細胞，熒光顯

2、微鏡下估算轉染效率。
　　3、將HK-2分為四組：control組、LPS刺激組、miR-494過表達+LPS組、miR-494陰性轉染+LPS組，除control組外，各組細胞予以相應處理后再均以1 ug/ml LPS干預6 h。用Real-time PCR檢測各組miR-494、ATF3的表達水平。Annexin V-FITC/PI流式細胞法分別檢測各組細胞的凋亡率。采用ELISA法檢測各組細胞培養(yǎng)液中IL-6、TNF-α的濃

3、度。
　　結果：
　　1、LPS刺激1 h后，HK-2細胞中miR-494的表達水平即達到頂峰，為0 h組的3.19±0.21倍（P＜0.05），3 h、6 h和12 h的表達量逐漸下降，與0 h組的miR-494表達量均有統(tǒng)計學意義。
　　2、LV-miR-494慢病毒表達載體轉染72 h后熒光顯微鏡下觀察ZsGreen綠色熒光，細胞轉染效率均達80％以上，qPCR檢測LV-miR-494+LPS組細胞miR-494

4、較control組的表達水平為8.57±0.50倍（P＜0.05），差異有統(tǒng)計學意義，提示轉染成功。
　　3、與control相比，LV-miR-494+LPS組、LV+LPS組及LPS組的miR-494表達水平分別為（8.57±0.50 vs2.47±0.04 vs2.34±0.02）；ATF3 mRNA表達水平為（2.12±0.37 vs5.84±0.42 vs5.45±0.53），差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）
　

5、　4、流式細胞檢測各組 HK-2細胞凋亡水平：與 control組比較，LPS組、LV-miR-494+LPS組及LV+LPS組的細胞凋亡率明顯高于control組（P＜0.05），LV+LPS組與LPS組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　5、ELISA法檢測各組細胞 IL-6、TNF-α的濃度：在LPS刺激下 LV-miR-494+LPS組、LV+LPS組、LPS組IL-6、TNF-α蛋白水平較control組均顯著

6、提高，且LV-miR-494+LPS組與其它兩組相比，IL-6、TNF-α蛋白水平顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），表明miR-494的過表達對LPS誘導HK-2細胞釋放IL-6、TNF-α有促進作用。
　　結論：
　　1、LPS可誘導HK-2細胞凋亡。
　　2、重組慢病毒轉染HK-2后，miR-494表達明顯上調，其靶基因ATF3表達下調。
　　3、過表達miR-494可顯著促進炎性因子的釋放，增強L