1、研究背景:骨肉瘤是來(lái)源于間葉組織源性的最常見的骨惡性腫瘤，可占骨的原發(fā)惡性腫瘤的近三分之一。骨肉瘤的特點(diǎn)為好發(fā)于青少年，惡性程度高，早期轉(zhuǎn)移且轉(zhuǎn)移率高。骨肉瘤的轉(zhuǎn)移不僅是預(yù)后差的表現(xiàn)也是造成治療失敗和患者死亡的主要原因。二十世紀(jì)七十年代以前，骨肉瘤的治療以單純截肢手術(shù)為主，但是效果差強(qiáng)人意，患者的5年生存率不足20％，且生存質(zhì)量差，自二十世紀(jì)七十年代以后隨著新輔助化療聯(lián)合保肢手術(shù)以及肺轉(zhuǎn)移瘤清掃術(shù)的綜合治療的理念的深入，患者無(wú)瘤5年生存

2、率提高到60％左右。但是，骨肉瘤的治療在過(guò)去的20年中進(jìn)入了一個(gè)平臺(tái)期，期待突破性的進(jìn)展。
　　 鋅指E盒結(jié)合蛋白1（zincfingerEboxbindingprotein-1，ZEB1）是鋅指結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)錄因子家族(zincfingertranscriptionfactor)中的重要一員，它是胚胎發(fā)育中所必須的轉(zhuǎn)錄因子。因此ZEB1基因突變將引起嚴(yán)重的畸形。雖然ZEB1是胚胎發(fā)育和細(xì)胞分化的關(guān)鍵影響因素，但它們?cè)谀[瘤生物學(xué)中的重要

3、作用直到最近才開始被發(fā)現(xiàn)。國(guó)內(nèi)外研究的證據(jù)已表明，ZEB1或直接或間接地抑制了E粘附蛋白及眾多極性蛋白質(zhì)的表達(dá)，這導(dǎo)致了原來(lái)極性的相互連接的上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)型為可在細(xì)胞基質(zhì)間自由移動(dòng)的間質(zhì)細(xì)胞，這稱為上皮細(xì)胞-間葉細(xì)胞轉(zhuǎn)型(epithelial-to-mesenchymaltransition，EMT)，這將增加多種腫瘤的侵襲和廣泛轉(zhuǎn)移的能力，探究ZEB1在骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展中的作用將可能為骨肉瘤的診治提供一個(gè)新的早期診斷指標(biāo)、預(yù)后評(píng)估指標(biāo)和基

4、因治療方法。
　　 第一章ZEB1蛋白在人骨肉瘤組織和骨軟骨瘤組織中的表達(dá)
　　 目的觀察ZEB1在骨肉瘤和骨軟骨瘤中的表達(dá)情況。方法對(duì)56例骨肉瘤和56例骨軟骨瘤石蠟切片進(jìn)行SABC法免疫組化染色，分析ZEB1的陽(yáng)性表達(dá)情況;用配對(duì)t檢驗(yàn)分析骨肉瘤組和骨軟骨瘤組的ZEB1陽(yáng)性表達(dá)有無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果56例骨肉瘤組織中ZEB1總陽(yáng)性表達(dá)率為89.3％(50/56)，其中弱陽(yáng)性表達(dá)33.4％(17/56)，強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)58.

5、9％(33/56)。56例骨軟骨瘤組織中陽(yáng)性表達(dá)率為33.9％(19/56)，無(wú)強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)配對(duì)t檢驗(yàn)結(jié)果，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組兩者間ZEB1表達(dá)存在顯著差異(P＜0.01)。結(jié)論ZEB1蛋白在大多數(shù)人骨肉瘤組織中高表達(dá)，可作為骨肉瘤診斷指標(biāo)之一。
　　 第二章ZEB1蛋白表達(dá)與骨肉瘤患者臨床病理因素相關(guān)性研究
　　 目的分析ZEB1蛋白在骨肉瘤表達(dá)及其與各臨床病理因素關(guān)系，回顧性分析ZEB1蛋白表達(dá)與骨肉瘤患者生存

6、期的關(guān)系。方法對(duì)入組的45例骨肉瘤患者進(jìn)行隨訪，收集瘤患者的年齡、性別、病理分型、Ennecking外科分期、病變部位、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)等臨床資料;采用卡方檢驗(yàn)對(duì)ZEB1蛋白表達(dá)與各臨床病理因素之間的關(guān)系進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析;對(duì)ZEB1蛋白表達(dá)與生存期的關(guān)系采用Kaplan-Meier法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析;以Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)單因素或多變量聯(lián)合與生存期的關(guān)系進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果ZEB1蛋白表達(dá)與骨肉瘤患者的年齡、性別、病理分型、病變部位均

7、無(wú)相關(guān)性(P＞0.05)，ZEB1蛋白表達(dá)與Ennecking外科分期、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)存在相關(guān)(P＜0.05)。隨訪發(fā)現(xiàn)，ZEB1蛋白陽(yáng)性表達(dá)患者中位生存時(shí)間為22.0個(gè)月，低于ZEB1蛋白陰性表達(dá)患者48.0個(gè)月的中位生存時(shí)間，陽(yáng)性表達(dá)患者與陰性表達(dá)患者生存時(shí)間有顯著性差異(P＜0.05)。ZEB1蛋白陰性表達(dá)患者1年生存率、2年生存率、3年生存率、4年生存率分別為78％，72％，65％，60％。陽(yáng)性組與陰性組逐年生存率兩兩比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差

8、異(P＜0.05)。將ZEB1蛋白表達(dá)和骨肉瘤患者臨床病理因素與患者的生存時(shí)間分別進(jìn)行單因素分析，結(jié)果顯示ZEB1蛋白表達(dá)、Ennecking外科分期、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)是影響骨肉瘤患者生存時(shí)間的因素(P值分別為:0.015、0.035、0.012、0.024)。Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)ZEB1蛋白表達(dá)、Ennecking外科分期是影響骨肉瘤患者生存預(yù)后的獨(dú)立因素(P值分別為:0.002、0.027)。結(jié)論ZEB1蛋白表達(dá)與骨肉瘤患者預(yù)