1、特發(fā)性脊柱側凸(adolescent idiopathic scoliosis，AIS)患者最終大多需要手術矯正，不僅治療方案復雜，費用高，而且術中使用的各種融合材料包括自體骨、異體骨、人工骨等都存在著各種不足。椎間盤作為脊柱重要的連接單位，如果能通過人工干預使之骨化，則有望達到脊柱融合的目的。 椎間盤由纖維環(huán)和髓核兩部分構成，椎間盤纖維環(huán)和髓核的共同特點是細胞外基質豐富而細胞數量較少，類軟骨細胞存在于髓核及纖維環(huán)內層，成纖維細

2、胞主要存在于纖維環(huán)的外層。當具有相應遺傳物質基礎的細胞處于有利于分化逆轉的環(huán)境中，會出現轉分化(transdifferentiation)。由一種分化狀態(tài)變?yōu)榱硪环N分化狀態(tài)。 研究目的： 觀察在實驗室模擬的體外環(huán)境中椎間盤細胞的細胞學特性與表型表達的特點，觀察在給予rh-BMP2和bFGF進行人工干預后，體外培養(yǎng)的椎間盤細胞的表型表達和分化特性。 實驗方法： 大體標本取自16-25歲青年患者，椎間盤本身無

3、病變，標本離體后迅速送到實驗室，仔細分離出纖維環(huán)和髓核，利用體外細胞培養(yǎng)技術建立腰椎間盤纖維環(huán)細胞和髓核細胞培養(yǎng)體系。觀察這兩種細胞在細胞因子rh-BMP2和bFGF誘導下的成骨表型及生物學特性的變化。實驗中按培養(yǎng)條件分為四個培養(yǎng)組：A組：DMEM/FBS培養(yǎng)液；B組：DMEM/FBS培養(yǎng)液+rh-BMP2；C組：DMEM/FBS培養(yǎng)液+bFGF；D組：DMEM/FBS培養(yǎng)液+rh-BMP2+bFGF。實驗觀察內容包括：細胞形態(tài)、生長曲

4、線，堿性磷酸酶活力、Ⅰ型膠原表達、Ⅱ型膠原表達、骨鈣素表達、茜素紅染色等。 實驗結果： 隨著培養(yǎng)時間的延長，纖維環(huán)細胞呈明顯的趨化性生長，極性排列，局部有細胞基質堆積．rh-BMP2對纖維環(huán)細胞增殖無明顯影響；能夠提高堿性磷酸酶的活力；促進Ⅰ型膠原的表達；提高骨鈣素的表達；促進鈣鹽的沉積，形成鈣結節(jié)。bFGF能夠明顯促進細胞增殖；降低了堿性磷酸酶的活力；促進Ⅰ型膠原的表達；促進鈣鹽沉積，形成鈣結節(jié)。當rh-BMP2和bF

5、GF聯合使用時，能夠促進細胞增殖；對堿性磷酸酶活力無明顯影響；能夠強力促進骨鈣素、Ⅰ型膠原的表達和鈣鹽沉積，其效果優(yōu)于單獨使用任何一種細胞因子。 原代髓核細胞呈多角形，傳代后變成星形或長梭形，培養(yǎng)后期呈明顯的趨化性生長，極性排列。rh-BMP2能夠抑制細胞的增殖；提高骨鈣素的表達；促進鈣鹽沉積，形成鈣結節(jié)。bFGF能夠促進細胞增殖；促進Ⅰ型膠原的表達；促進鈣鹽沉積，形成鈣結節(jié)。當rh-BMP2和bFGF聯合使用時，能夠促進細胞增