1、目的：建立HBV轉(zhuǎn)基因小鼠移植型肝癌模型，通過對其進(jìn)行免疫抑制藥物干預(yù)，探討免疫抑制狀態(tài)下血清學(xué)HBsAg陽性表達(dá)對小鼠肝臟腫瘤復(fù)發(fā)及進(jìn)展的影響，進(jìn)而為臨床應(yīng)用HBsAg陽性供肝行肝移植治療以挽救晚期肝癌患者的可行性提供理論依據(jù)。
　　 方法：實(shí)驗(yàn)分為兩部分:第一部分，建立小鼠移植型肝癌的動(dòng)物模型:實(shí)驗(yàn)前期進(jìn)行小鼠H22腫瘤細(xì)胞保種傳代，選用Balb/c小鼠90只，分別于脾包膜下接種不同數(shù)量的腫瘤細(xì)胞株，按照接種腫瘤細(xì)胞數(shù)量隨機(jī)

2、分為3組（A組:1*105,B組:1*106,C組:1*107），每組30只;術(shù)后給予免疫抑制劑腹腔注射，模擬肝移植術(shù)后免疫抑制狀態(tài)，分別于術(shù)后1周、2周及3周觀察腫瘤復(fù)發(fā)情況。第二部分，研究免疫抑制狀態(tài)下血清學(xué)HBsAg陽性表達(dá)對小鼠肝癌復(fù)發(fā)及進(jìn)展的影響:實(shí)驗(yàn)組（H組）選用HBV轉(zhuǎn)基因Balb/c小鼠30只，對照組（D組）選用普通Balb/c小鼠30只，體重均為18g-22g，根據(jù)術(shù)后處死時(shí)間各組再隨機(jī)分為3小組:術(shù)后一周（H1和D1

3、）、術(shù)后兩周(H2和D2)、三周（H3和D3），每組各10只。按照第一部分的實(shí)驗(yàn)方法，分別給予脾包膜下接種H22腫瘤細(xì)胞株（含腫瘤細(xì)胞數(shù)為1*106個(gè)），術(shù)后給予環(huán)孢素(5mg/Kg/d)、甲潑尼龍琥珀酸鈉(10mg/Kg/d)進(jìn)行免疫抑制干預(yù)治療至觀察結(jié)束，模擬肝移植術(shù)后免疫抑制狀態(tài)。分別于術(shù)后1周、2周、3周處死小鼠，觀察比較各組小鼠腫瘤復(fù)發(fā)率、荷瘤肝重;HE染色觀察腫瘤組織形態(tài);免疫組組織化學(xué)法檢測肝組織ICAM-1、VEGF及P

4、CNA的表達(dá)。采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差的形式表示，對數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn)，采用獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)或方差分析，以P＜0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;計(jì)數(shù)資料比較采用x2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　 結(jié)果：
　　 第一部分:接種105數(shù)量級H22腫瘤細(xì)胞株的小鼠術(shù)后1周、2周、3周的復(fù)發(fā)率分別為:0(0/10)、20％(2/10)、30％(3/10);接種106數(shù)量級腫瘤細(xì)

5、胞株小鼠術(shù)后1周、2周、3周的復(fù)發(fā)率分別為:20％(2/10)、40％(4/10)、70％(7/10);接種107數(shù)量級腫瘤細(xì)胞株小鼠術(shù)后1周、2周、3周的復(fù)發(fā)率分別為:50％(5/10)、80％(8/10)、80％(8/10)。成功建立小鼠移植型肝癌模型，為進(jìn)行進(jìn)一步相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究提供穩(wěn)定實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。
　　 第二部分:不同組別小鼠肝臟腫瘤復(fù)發(fā)率:H1(20％)，H2(50％)，H3(80％);D1(20％)，D2(40％)，D

6、3(70％)，實(shí)驗(yàn)組與對照組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。荷瘤肝重:H1（1.04±0.05）g，H2（1.16±0.06）g，H3（1.29±0.06）g;D1（1.01±0.05）g，D2（1.14±0.04）g，D3（1.25±0.08）g。病理結(jié)果:H1和D1組肝組織HE染色偶可見灶狀腫瘤組織;H2及D2組HE染色可見肝組織內(nèi)片狀腫瘤病灶;H3及D3呈現(xiàn)彌漫性肝癌表現(xiàn)。肝組織PCNA表達(dá)情況:H1陽性指數(shù)為22.2％，D1陽

7、性指數(shù)為22.8％，兩組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.81); H2陽性指數(shù)為44.2％，D2陽性指數(shù)為43.6％，兩組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.84); H3陽性指數(shù)為56.8％，D3陽性指數(shù)為53.4％，兩組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.39)。VEGF表達(dá)情況:H1陽性指數(shù)為20.8％，D1陽性指數(shù)為17％，兩組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.09）;H2陽性指數(shù)為25.9％，D2陽性指數(shù)為26.7％，兩組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.77); H3陽性指數(shù)為36.2

8、％，D3陽性指數(shù)為37.3％，兩組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.91)。ICAM-1表達(dá)情況:H1陽性指數(shù)為15.4％，D1陽性指數(shù)為14.5％，兩組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.59); H2陽性指數(shù)為23.2％，D2陽性指數(shù)為22.8％，兩組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.79); H3陽性指數(shù)為31.3％，D3組陽性指數(shù)為29.4％，兩組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.25）。
　　 結(jié)論：
　　 1、脾包膜下接種H22腫瘤細(xì)胞可成功建立穩(wěn)定小鼠移植