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![重組畢赤酵母產(chǎn)S-腺苷蛋氨酸的發(fā)酵條件優(yōu)化及其分離提取.pdf_第1頁(yè)](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/14/18/98340eaf-445d-4299-8caf-051ac5f7ecfe/98340eaf-445d-4299-8caf-051ac5f7ecfe1.gif)
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1、S-腺苷蛋氨酸(SAM)是L-蛋氨酸的活性形式,具有轉(zhuǎn)甲基、轉(zhuǎn)氨丙基、轉(zhuǎn)硫基的作用,它對(duì)治療肝病、抑郁癥、關(guān)節(jié)炎等疾病具有較好的療效,且副作用小。國(guó)內(nèi)對(duì)SAM的研究起步較晚,因發(fā)酵水平限制、分離純化成本高及其不穩(wěn)定性,到目前為止國(guó)內(nèi)仍未能工業(yè)化生產(chǎn)SAM,市場(chǎng)上用于治療的SAM產(chǎn)品全部依賴于進(jìn)口。
針對(duì)SAM的低產(chǎn)現(xiàn)狀,本論文首先建立了利用HPLC-UV測(cè)定發(fā)酵過(guò)程SAM濃度的方法,對(duì)HPLC-LN法檢測(cè)SAM含量的色譜條
2、件進(jìn)行優(yōu)化,最佳色譜條件:流動(dòng)相為0.01mol/L甲酸銨(甲酸調(diào)pH3.5,0.22μm水膜過(guò)濾):甲醇=97:3,流速:0.6 mL/min,柱溫30℃,檢測(cè)波長(zhǎng):260 nm。同時(shí)還建立了利用自制甲醇傳感器檢測(cè)發(fā)酵液中甲醇濃度的兩種方法:尾氣測(cè)量法及硅膠管測(cè)量法。尾氣測(cè)量法響應(yīng)時(shí)間短、檢測(cè)方便;硅膠管測(cè)量法以0.1mL/min氮?dú)鉃檩d氣,穩(wěn)定性良好。
其次,在搖瓶發(fā)酵的基礎(chǔ)上考察了L-蛋氨酸及甲醇濃度對(duì)重組畢赤酵母發(fā)
3、酵生產(chǎn)SAM的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,L-蛋氨酸濃度及甲醇濃度對(duì)重組畢赤酵母發(fā)酵生產(chǎn)SAM有顯著的影響。在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加7.5 g/L L-蛋氨酸,SAM產(chǎn)量最高,達(dá)到0.81 g/L。利用甲醇傳感器監(jiān)測(cè)發(fā)酵過(guò)程甲醇濃度,甲醇濃度在10-30 g/L之間,最有利于SAM的生產(chǎn),其中在15 g/L甲醇濃度下獲得的SAM產(chǎn)量最高,達(dá)到1.41 g/L,相比每隔24 h補(bǔ)加1%甲醇的對(duì)照組,SAM產(chǎn)量提高了21%。
進(jìn)一步在7L發(fā)
4、酵罐上對(duì)甘油-甲醇混合流加培養(yǎng)基的流加方式進(jìn)行了優(yōu)化。7L發(fā)酵罐對(duì)甲醇誘導(dǎo)階段補(bǔ)加不同甘油含量的甘油-甲醇混合流加培養(yǎng)基的研究結(jié)果表明,流加不同甘油含量的甘油-甲醇混合流加培養(yǎng)基對(duì)SAM的產(chǎn)量有影響,在發(fā)酵過(guò)程流加10%(w/v)甘油-甲醇混合流加培養(yǎng)基,SAM產(chǎn)量最高,達(dá)到6.09 g/L。在甲醇誘導(dǎo)的不同時(shí)間段,分別流加不同甘油含量的甘油-甲醇混合流加培養(yǎng)基,SAM產(chǎn)量得到進(jìn)一步提高,達(dá)到9.79g/L。
最后,對(duì)所收
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