1、冠心病是常見(jiàn)且多發(fā)性疾病，雖然治療藥物不斷研制推出，介入治療和外科手術(shù)不斷進(jìn)步，但冠心病的治療仍然是當(dāng)前和未來(lái)醫(yī)療畫(huà)臨的棘手問(wèn)題。冠心病的本質(zhì)是動(dòng)脈血管病變，血管結(jié)構(gòu)與功能的改善是治療冠心病的關(guān)鍵。干/祖細(xì)胞具有自我更新和分化潛能，能夠產(chǎn)生高度分化的功能細(xì)胞，作為重要的修復(fù)因子在機(jī)體的損傷修復(fù)中起重要作用。但冠心病患者外周血中的干/祖細(xì)胞數(shù)量顯著下降，且與心血管危險(xiǎn)因素呈高度負(fù)相關(guān)，因此提高冠心病患者外周血中的干/祖細(xì)胞數(shù)量，對(duì)冠心病的

2、治療具有積極作用。干/祖細(xì)胞治療為冠心病患者帶來(lái)了希望。干/祖細(xì)胞移植治療冠心病取得了令人鼓舞的結(jié)果，但目前還處于起步階段，與臨床推廣還有很大一段距離。因而動(dòng)員自身的干/祖細(xì)胞的研究日益受到關(guān)注。EECP是一項(xiàng)安全無(wú)創(chuàng)的冠心病治療方式，在開(kāi)通冠狀動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)、改善血管內(nèi)皮功能方面扮演了重要角色，EECP能否動(dòng)員患者自身的干/祖細(xì)胞?動(dòng)員的干/祖細(xì)胞能否改善冠心病患者的血管功能?這方面的研究國(guó)內(nèi)外少見(jiàn)報(bào)道。
　　 動(dòng)脈硬化是心血管

3、疾病的重要危險(xiǎn)因素，脈搏波傳導(dǎo)速度(PWV)是評(píng)價(jià)大動(dòng)脈硬度的經(jīng)典測(cè)量指標(biāo)，是大動(dòng)脈結(jié)構(gòu)與功能異常的總體反映，EECP能否改善冠心病患者的肱-踝動(dòng)脈PWV(baPWV)目前還未見(jiàn)報(bào)道。
　　 本課題重點(diǎn)探討EECP對(duì)冠心病患者干/祖細(xì)胞動(dòng)員的作用以及干/祖細(xì)胞動(dòng)員與血管內(nèi)皮功能改善的關(guān)系；探討EECP對(duì)冠心病患者肱-踝動(dòng)脈PWV(baPWV)的影響。通過(guò)本研究，不僅為EECP治療機(jī)制的闡明奠定了基礎(chǔ)，也為冠心病患者提高自身循環(huán)干

4、/祖細(xì)胞數(shù)量找到一種途徑，也為EECP更廣泛的臨床治療應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　 全文包括三個(gè)部分：
　　 第1部分 EPC-CFU的培養(yǎng)
　　 1.1目的:
　　 從冠心病患者的外周血分離培養(yǎng)EPC-CFU；建立穩(wěn)定可靠的EPC-CFU培養(yǎng)體系，從而為下一步研究EECP對(duì)EPC-CFU的影響奠定基礎(chǔ)。
　　 1.2方法:
　　 1.2.1.外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離。
　　 1.2.2

5、.外周血EPC-CFU的培養(yǎng)。
　　 1.2.3. EPC-CFU的鑒定。
　　 1.3結(jié)果:
　　 1.3.1. EPC-CFU的培養(yǎng)
　　 培養(yǎng)的EPC-CFU的中間是一簇圓形的細(xì)胞，周圍有許多細(xì)而平的長(zhǎng)梭形細(xì)胞放射出來(lái)。
　　 1.3.2. EPC-CFU的鑒定
　　 培養(yǎng)的EPC-CFU用Dil-ac-LDL和FITC-UEA-1進(jìn)行染色，雙染陽(yáng)性細(xì)胞被認(rèn)為是EPC-CFU。并以C

6、D31對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光染色，進(jìn)一步確定其內(nèi)皮細(xì)胞特性。
　　 1.4結(jié)論:
　　 1.4.1.成功地從冠心病患者外周血中分離培養(yǎng)出EPC-CFU，為下一步的實(shí)驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。
　　 第2部分EECP對(duì)冠心病患者干/祖細(xì)胞的動(dòng)員及其機(jī)制探討
　　 2.1目的:
　　 研究EECP對(duì)冠心病患者EPC-CFU、CD133+細(xì)胞、CD34+細(xì)胞和CD34+CD133+細(xì)胞的動(dòng)員以及對(duì)干細(xì)胞動(dòng)員相關(guān)因子

7、G-CSF、VEGF、HGF的影響；分析探討這些干/祖細(xì)胞的數(shù)量變化、干細(xì)胞動(dòng)員相關(guān)因子水平的變化與肱動(dòng)脈血流介導(dǎo)的舒張功能(FMD)改善的相關(guān)關(guān)系；分析探討這些干/祖細(xì)胞的數(shù)量變化與干細(xì)胞動(dòng)員相關(guān)因子水平變化的相關(guān)關(guān)系。
　　 2.2方法:
　　 2.2.1.體外反搏，由中山一院反搏室的工作人員操作。反搏36小時(shí)，每天1小時(shí)，每周5-6次。
　　 2.2.2.培養(yǎng)EPC-CFU，EECP前后觀察EPC-CFU的

8、數(shù)目，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 2.2.3.流式檢測(cè)EECP前后外周血CD133+細(xì)胞、CD34+細(xì)胞和 CD34+CD133+細(xì)胞的數(shù)目。
　　 2.2.4.液相芯片和ELISA檢測(cè)EECP前后外周血干細(xì)胞動(dòng)員相關(guān)因子 G-CSF、VEGF和HGF的水平。
　　 2.2.5.超聲檢測(cè)EECP前后肱動(dòng)脈FMD。
　　 2.2.6.分析這些干/祖細(xì)胞數(shù)量的變化、干細(xì)胞動(dòng)員相關(guān)因子水平的變化與內(nèi)皮功能改善的相

9、關(guān)關(guān)系以及這些干/祖細(xì)胞的數(shù)量變化與干細(xì)胞動(dòng)員相關(guān)因子水平變化的相關(guān)關(guān)系。
　　 2.3結(jié)果:
　　 2.3.1.EECP對(duì)EPC-CFU的數(shù)目的影響 EECP治療后EPC-CFU的數(shù)量顯著升高。
　　 2.3.2.EECP對(duì)CD133+、CD34+和CD34+CD133+干/祖細(xì)胞的數(shù)量的影響
　　 EECP治療后CD133+細(xì)胞、CD34+細(xì)胞的數(shù)量明顯升高，而對(duì)CD34+CD133+數(shù)量沒(méi)有明顯的影

10、響。
　　 2.3.3.EECP對(duì)干細(xì)胞動(dòng)員相關(guān)因子的影響
　　 EECP治療后G-CSF和HGF的水平明顯升高，而對(duì)VEGF的水平?jīng)]有明顯的影響。
　　 2.3.4.EECP對(duì)FMD的影響 EECP治療后FMD明顯改善。
　　 2.3.5.干/祖細(xì)胞的數(shù)量變化與FMD改善的相關(guān)關(guān)系
　　 EPC-CFU的數(shù)量增加與FMD的改善呈顯著正相關(guān)；CD133+細(xì)胞數(shù)量的增加與EECP前后FMD的改善呈正

11、相關(guān)關(guān)系;CD34+細(xì)胞數(shù)量的增加與EECP前后FMD的改善無(wú)相關(guān)關(guān)系。
　　 2.3.6.干細(xì)胞動(dòng)員相關(guān)因子的變化與FMD改善的相關(guān)關(guān)系
　　 HGF水平的增加與FMD的改善呈顯著正相關(guān)；而G-CSF水平的增加與EECP前后FMD的改善無(wú)相關(guān)關(guān)系。
　　 2.3.7.干/祖細(xì)胞的數(shù)量變化與干細(xì)胞動(dòng)員相關(guān)因子水平變化的相關(guān)關(guān)系
　　 EPC-CFU、CD133+細(xì)胞、CD34+細(xì)胞的數(shù)量增加與HGF、G-

12、CSF水平的增加均無(wú)相關(guān)關(guān)系。
　　 2.4結(jié)論:
　　 2.4.1.EECP能顯著增加外周血中EPC-CFU、CD133+細(xì)胞、CD34+細(xì)胞的數(shù)量。
　　 2.4.2.EECP能顯著增加外周血中G-CSF和HGF的水平。
　　 2.4.3.外周血中EPC-CFU數(shù)量的增加與EECP前后FMD的改善呈顯著正相關(guān)，外周血中CD133+細(xì)胞數(shù)量的增加與EECP前后FMD的改善呈正相關(guān)關(guān)系。
　　 2

13、.4.4.外周血中HGF數(shù)量的增加與EECP前后FMD的改善呈顯著正相關(guān)。
　　 第3部分EECP對(duì)冠心病患者大動(dòng)脈彈性功能的影響
　　 3.1目的:
　　 研究EECP對(duì)冠心病患者肱-踝動(dòng)脈PWV(baPWV)的作用。
　　 3.2方法:
　　 3.2.1.體外反搏，由中山一院反搏室的工作人員嚴(yán)格按照反搏裝置說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。反搏36小時(shí)，每天1小時(shí)，每周5-6次。
　　 3.2.2.大動(dòng)脈彈

14、性功能的測(cè)定：使用全自動(dòng)動(dòng)脈硬化診斷裝置進(jìn)行baPWV的測(cè)量，同時(shí)檢測(cè)患者的ABI、血壓、心率、脈壓等指標(biāo)。
　　 3.3結(jié)果;
　　 3.3.1. EECP對(duì)收縮壓、脈壓、心率的影響
　　 EECP前后收縮壓、脈壓、心率的變化均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 3.3.2. EECP對(duì)ABI的影響
　　 EECP前后ABI的變化均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 3.3.3. E