1、人類疾病往往是環(huán)境因素與遺傳因素共同作用的結(jié)果，探討基因與環(huán)境的相互作用機(jī)制與規(guī)律，對于防治環(huán)境因素造成的機(jī)體危害具有重要意義。 為了進(jìn)一步深入了解JWA基因與紅白血病的關(guān)系，本課題用hemin、熱應(yīng)激及hemin與熱應(yīng)激聯(lián)合處理K562細(xì)胞，觀察JWA基因在這些細(xì)胞模型中表達(dá)的特點(diǎn)和規(guī)律，探討JWA在細(xì)胞應(yīng)答hemin和應(yīng)激信號通路中的作用和分子機(jī)制，以期為發(fā)展新的物理療法與化療結(jié)合治療紅白血病提供依據(jù)。 一、JWA對h

2、emin處理K562細(xì)胞的應(yīng)答：建立hemin誘導(dǎo)K562細(xì)胞向紅系分化的細(xì)胞模型：用不同濃度hemin處理K562細(xì)胞不同時間，以測定血紅蛋白的相對表達(dá)含量來確定細(xì)胞模型建立的成功。用RT-PCR方法檢測JWAmRNA表達(dá)變化；用Westernblot方法檢測JWA蛋白表達(dá)。 二、JWA基因?qū)釕?yīng)激處理K562細(xì)胞的應(yīng)答：熱應(yīng)激(42℃)處理K562細(xì)胞2h，K562細(xì)胞無明顯變化。用42℃水浴處理K562細(xì)胞不同時間(10、

3、30、45、60、90和120min)，作用30min可使JWAmRNA水平表達(dá)顯著增加1.87±0.13倍；作用120min，JWA蛋白表達(dá)水平明顯增高7.00±1.73倍。 三、JWA基因?qū)emin與熱應(yīng)激聯(lián)合作用K562細(xì)胞的應(yīng)答：以30μMhemin處理K562細(xì)胞48h，然后42℃水浴30min，JWAmRNA表達(dá)雖有所增加，但低于hemin或熱應(yīng)激的單獨(dú)處理時的表達(dá)水平。 四、JWA基因應(yīng)答hemin和熱應(yīng)

4、激的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)：為了探討hemin和熱應(yīng)激對JWA表達(dá)調(diào)節(jié)是否通過其激活的核轉(zhuǎn)錄因子與JWA基因啟動子反應(yīng)元件結(jié)合而實(shí)現(xiàn)的，根據(jù)JWA基因啟動子所含有的不同的反應(yīng)元件，分別構(gòu)建的含JWA部分啟動子的P1、P2、P3以及pCAT質(zhì)粒。質(zhì)粒P1含有hemin和熱休克反應(yīng)元件；質(zhì)粒P2僅含有熱休克反應(yīng)元件，不含hemin反應(yīng)元件；質(zhì)粒P3兩個反應(yīng)元件均不包含。用無啟動子的空CAT質(zhì)粒pCAT作為對照質(zhì)粒，3種報告載體與參照質(zhì)粒β-gal按4∶1

5、的比例分別共轉(zhuǎn)染細(xì)胞。轉(zhuǎn)染細(xì)胞6h后，加入hemin(終濃度為30μM)繼續(xù)培養(yǎng)48h，再42℃處理30min。經(jīng)hemin、熱應(yīng)激單獨(dú)處理以及hemin和熱應(yīng)激聯(lián)合作用后，質(zhì)粒P1、P2的轉(zhuǎn)錄活性均明顯高于對照。質(zhì)粒P1在hemin誘導(dǎo)處理后，其轉(zhuǎn)錄活性顯著增高，質(zhì)粒P2則不論單獨(dú)或聯(lián)合處理，其轉(zhuǎn)錄活性均升高。 五、JWA基因參與應(yīng)答hemin和熱應(yīng)激的相關(guān)信號通路：用MEK-1的抑制劑PD98059可以抑制hemin誘導(dǎo)K5