1、分類號密級公開UDC學號20111013038青海師范大學碩士學位論文玉樹地區(qū)獨一味遺傳多樣性簡單序列重復區(qū)間擴增玉樹地區(qū)獨一味遺傳多樣性簡單序列重復區(qū)間擴增分析分析研究生姓名王京導師姓名（職稱）羅桂花，教授喬楓，教授申請學位類別碩士學科專業(yè)名稱理學學科專業(yè)名稱生態(tài)學研究方向名稱遺傳學論文提交日期2014年5月論文答辯日期2014年6月學位授予單位青海師范大學學位授予日期答辯委員會主席評閱人，I玉樹地區(qū)獨一味遺傳多樣性簡單序列重復區(qū)間擴

2、增玉樹地區(qū)獨一味遺傳多樣性簡單序列重復區(qū)間擴增分析分析摘要本論文以玉樹地區(qū)所采集的獨一味（Lamiophlomisrotata）為材料，利用簡單序列重復區(qū)間擴增（ISSR）分子標記方法對玉樹地區(qū)不同的10個種群進行遺傳多樣性分析，目的是為了解玉樹地區(qū)獨一味遺傳多樣性的水平，遺傳結構以及遺傳分化的狀況，此研究的意義在于為獨一味資源的開發(fā)與保護提供一定的理論基礎。本論文所研究的主要結果如下：獨一味ISSRPCR最佳反應體系（總體系體積為25

3、μL）為：Taq酶（1.0U）、Mg2（1.5mmolL）、DNA模板（75ng）、dNTP（0.05mmolL）、引物（0.75μmolL）；最優(yōu)的擴增程序為：95℃預變性5min，然后進入下列循環(huán)——95℃變性40s，復性溫度由具體的引物決定，復性40s，72℃延伸90s，循環(huán)40次，循環(huán)結束后72℃總延伸7min，4℃保存。從80條ISSR引物中篩選出18條特異性強多態(tài)性好的引物，并在玉樹地區(qū)10個獨一味種群的群體PCR得出188

4、個擴增位點，其中多態(tài)位點有187個，多態(tài)位點率（PPL）達99.47%，經軟件計算分析得出：在物種水平上，獨一味種群多態(tài)位點率（PPL）為99.47%，有效等位基因（Ne）為1.4777，Nei基因遺傳多樣度指數（He）為0.2904，香農多樣性信息指數（I）為0.4494。通過數據處理，得出遺傳結構的相關數據為：玉樹藏族自治州獨一味10個種群的總遺傳變異（Ht）為0.2904，種群內遺傳變異（Hs）為0.2180，群體間基因分化系數（

5、Gst）為0.2493，基因流（Nm）為1.5055。玉樹地區(qū)10個獨一味種群的遺傳距離在0.0076至0.2061之間，種群間平均的遺傳距離為0.1052，經MEGA5軟件聚類發(fā)現：種群ZY和種群HB、種群XQ、種群CY聚類，而種群HT與種群SP聚類，種群BX和種群BZ聚類在與種群CF聚類，最后種群CD不與任何種群聚類，成為單獨的一個分支。綜合分析，玉樹地區(qū)獨一味種群遺傳多樣性在整體和平均水平上都呈現較高的多樣性，而個別種群所呈現出來