1、該文以17β-雌二醇誘導(dǎo)的成熟雌性玫瑰無須鲃的血漿和卵黃生成期的卵巢組織為實驗材料,用Sephadex G-200葡聚糖凝膠過濾柱和DEAE-23纖維素弱陰離子交換柱首次從玫瑰無須鲃體內(nèi)純化到了卵黃蛋白原和卵黃脂磷蛋白,并進(jìn)行了結(jié)構(gòu)特性的研究.純化的玫瑰無須鲃Vg在非變性膠電泳中分子量為450kDa,SDS變性膠電泳中分子量為167kDa,表明是由三個相同的亞基構(gòu)成;而Lv非變性膠電泳分子量為370kDa,是由125,110,76kDa

2、三個不同的亞基組成,這在硬骨魚中是首次報道.非變性膠電泳后的凝膠分別利用蘇丹黑B進(jìn)行脂蛋白染色、高碘酸-希夫試劑進(jìn)行糖蛋白染色和甲基綠進(jìn)行磷蛋白染色,結(jié)果顯示玫瑰無須鲃Vg是一種富含糖、脂、磷的蛋白,而Lv則是明顯的糖脂蛋白,含磷較少.分別用純化的玫瑰無須鲃Vg和Lv免疫小白鼠得到鼠源多克隆抗血清.用免疫雙擴散的方法測得這兩種蛋白抗血清的效價為1:32和1:64.Western blotting檢測顯示抗血清的特異性較好,還發(fā)現(xiàn)Vg和L

3、v之間有明顯的免疫交叉反應(yīng)性,說明兩者具有相同的免疫原性.通過免疫雙擴散還發(fā)現(xiàn)在通常條件下,Vg具有明顯的雌特異性和種特異性,而Lv表現(xiàn)出明顯的雌特異性、組織特異性和種特異性.利用人、草魚、蟾蜍、雞和兔的血紅細(xì)胞對Vg和Lv進(jìn)行血凝實驗后發(fā)現(xiàn)它們都能特異性地對雞血紅細(xì)胞產(chǎn)生強烈的凝集作用,效價分別為2<'9>和2<'8>.這是首次報道硬骨魚類的Vg和Lv具有特異性凝血活性.通過對凝集條件的研究發(fā)現(xiàn),Vg和Lv都是對熱敏感、在中性條件下凝

4、血效價較高、對SDS和巰基乙醇穩(wěn)定的糖蛋白,但是Vg是一種典型的鈣離子依賴性的糖蛋白,而Lv則表現(xiàn)不是很明顯.此外通過凝集活性部位的研究證明了Vg和Lv的凝集活性與糖蛋白有關(guān),Vg和Lv相應(yīng)的抗原抗體復(fù)合物基本喪失了對雞血紅細(xì)胞的凝集能力.糖專一性抑制實驗首次證明Vg和Lv的血凝活性能被D-葡萄糖、D-甘露糖和N-乙酰-D-葡萄糖胺所抑制,其中N-乙酰葡萄糖胺對Vg抑制作用最強,最小抑制濃度為16mM;D-甘露糖對Lv抑制作用最強,最小