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文檔簡介
1、山羊(Capra hircus)是一種重要的經(jīng)濟動物,它為人們提供了優(yōu)質(zhì)的皮、毛和動物蛋白。山羊的產(chǎn)羔率較低,且遺傳力也很低,限制了其育種進程。近年來全國肉羊產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅速,傳統(tǒng)的育種方法已經(jīng)很難滿足人們的需求。安徽白山羊以性早熟、繁殖力高而著稱,母羊全年發(fā)情,一年產(chǎn)兩胎或兩年產(chǎn)三胎,產(chǎn)羔率高,是研究山羊繁殖性狀的理想材料。相較于綿羊,山羊高繁殖力相關基因的研究成果還不多。因此,本研究選取單羔和多羔安徽白山羊發(fā)情期卵巢為試驗材料,通過RN
2、A-Seq(Quantification)的方法來篩選和分析它們之間的差異表達基因,尋找控制山羊高繁殖力的主效基因,為山羊的分子育種提供理論依據(jù)。本試驗分為以下2個部分:
1.單、多羔安徽白山羊卵巢組織差異表達基因的篩選和分析
為了篩選與安徽白山羊高繁殖力相關的基因,根據(jù)羊場最近5年的繁殖記錄,挑選單羔和多羔母羊各3只,利用RNA-Seq(Quantification)技術對單羔和多羔安徽白山羊卵巢組織進行了高通量測
3、序,結果在2個文庫里都產(chǎn)生了超過5,900,000的原始數(shù)據(jù),純凈序列占原始數(shù)據(jù)的比例分別達到98.60%和98.16%。在15890個檢測到的基因中,以FDR≤0.001并且|log2Ratio|≥1為標準篩選出了2201個差異表達的基因,其中1583個在多羔山羊卵巢中上調(diào),618個在多羔山羊卵巢中下調(diào)。差異表達基因共參與了50個GO分類,在3個主要GO分類中占據(jù)優(yōu)勢地位的分別是細胞的過程、細胞和細胞部分、結合。KEGG Pathwa
4、y顯著性富集分析發(fā)現(xiàn),差異表達基因共參與了244條Pathway,以Qvalue≤0.05為篩選標準,發(fā)現(xiàn)富集條目主要集中在細胞外基質(zhì)受體相互作用、粘著斑和肌動蛋白細胞骨架調(diào)節(jié)等11條信號通路上。隨機挑選10個基因用定量PCR技術對試驗結果的準確性進行了驗證。最后經(jīng)生物信息學分析,初步篩選出了12個可能與山羊高繁殖力有關的基因,其中FER1L4、GVINP1、GVIN1、Itga4和OPN可能是重點候選基因。本研究通過RNA-seq(Q
5、uantification)技術篩選和分析了單羔和多羔安徽白山羊卵巢組織中的差異表達基因,這些結果為探索山羊高繁殖力提供了新的候選基因,為更加深入研究山羊高繁殖力分子機制奠定了基礎。
2. FER1L4和SRD5A2基因在山羊不同組織中的表達譜分析
為了進一步分析差異表達基因與山羊高繁殖力之間的關系,挑選單羔、多羔安徽白山羊及波爾山羊各3只,分別采集其心、肝、脾、肺、腎、肌肉、卵巢、輸卵管、子宮和小腸組織,采用qPC
6、R的方法分析FER1L4和SRD5A2基因在山羊不同組織的表達譜。結果表明,F(xiàn)ER1L4和SRD5A2基因在安徽白山羊和波爾山羊中的表達呈現(xiàn)出一定的組織特異性:FER1L4在安徽白山羊和波爾山羊的卵巢中均表達,而在心、腎和子宮中都幾乎不表達;SRD5A2基因在安徽白山羊和波爾山羊的卵巢中均表達,而在心、肺、子宮和小腸也幾乎不表達,且在單羔安徽白山羊和波爾山羊的肝中均特異性高表達。試驗結果表明,F(xiàn)ER1L4和SRD5A2基因可能與安徽白山
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