1、家禽的繁殖性狀，包括開產(chǎn)日齡、產(chǎn)蛋數(shù)、蛋重等是現(xiàn)代家禽生產(chǎn)中重要的經(jīng)濟(jì)性狀。研究家禽繁殖性狀相關(guān)的基因?qū)τ诮沂居绊懠仪莓a(chǎn)蛋性能的的遺傳機(jī)制和優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)蛋雞的選育有重要的意義。候選基因法是一種定位數(shù)量性狀基因的主要方法，這種方法是依據(jù)生物體內(nèi)已知的或可能的生理生化過程來選擇相關(guān)基因并對其與表型的關(guān)系進(jìn)行探討。利用候選基因鑒定法定位主效基因在畜禽中已有許多成功的范例，如雞性連鎖矮小基因，豬應(yīng)激綜合癥基因等。差異顯示RT-PCR是研究基因差異表

2、達(dá)的重要方法。 本研究通過候選基因法分析了繁殖性狀相關(guān)基因FSHR、．BMPR- IB多態(tài)性與魯禽雞群產(chǎn)蛋性能的關(guān)系，分析了FSHR、BAIPR-IB和IGFBP-4 mRNA在濟(jì)寧百日雞和羅曼褐卵巢和卵泡中的發(fā)育性變化；采用差異顯示RT-PCR技術(shù)篩選并克隆了卵巢組織差異表達(dá)的幾個基因。 試驗一：克隆了濟(jì)寧百日雞、文昌雞、仙居雞、海藍(lán)褐、藏雞FSHR 5’調(diào)控區(qū)約1.8 kb的序列，GenBank登錄號DQ303232

3、～DQ3032327，檢出核苷酸變異48處。其中39處單核苷酸置換，1處三核苷酸置換和8處插入/刪除突變。-1046變異包含了A、G、T三個核苷酸，其余24個為轉(zhuǎn)換突變，14個屬于顛換突變。在-868位點存在一段200bp的插入序列，突變率極低，僅0.0698(魯禽群體)。對魯禽群體，PCR檢測了．868位點的多態(tài)性分布；變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測了-71“TG”插入/刪除突變；通過PCR-RFLP方法檢測了-237T→A的突變。關(guān)聯(lián)分

4、析的結(jié)果表明，上述三個位點的多態(tài)性對魯禽肉雞33周(E33)和42周(E42)的產(chǎn)蛋數(shù)效應(yīng)不顯著。通過三位點的Hardy-Weinberg檢驗，證明群體處于平衡狀態(tài)。比對-868插入序列發(fā)現(xiàn)其中有24 bp與人的SMARCALl基因(SWI/SNF related，matrix associated，actin dependent regulator ofchromatin，a-likel)同源，可能與染色質(zhì)的狀態(tài)調(diào)節(jié)有關(guān)。 試

5、驗二：克隆了濟(jì)寧百日雞、文昌雞、仙居雞、海藍(lán)褐、藏雞BMPR-IB外顯子6～7序列，GenBank登錄號NW_000203。檢出11處單核苷酸變異，其中9個轉(zhuǎn)換，2個顛換。PCR-SSCP和RFLP方法分別檢測了魯禽群體35C-T和287G→A兩處突變。與產(chǎn)蛋性能E33和E42關(guān)聯(lián)分析結(jié)果表明，這2個位點的效應(yīng)亦不顯著。Hardy-Weinberg檢驗35位點群體處于平衡狀態(tài)，而287位點群體處在不平衡狀態(tài)。 試驗三：通過半定量

6、RT-PCR分析了繁殖性狀相關(guān)基因FSHR、BMPR-lB和IGFBP-4 mRNA在濟(jì)寧百日雞和羅曼褐卵巢和卵泡中的發(fā)育性變化。兩品種兩期卵巢、卵泡中FSHR mRNA的表達(dá)差異極顯著；濟(jì)寧百日雞黃卵泡和F5卵泡中FSHR mRNA的表達(dá)差異顯著高于F3卵泡，與卵巢的表達(dá)水平差異極顯著。羅曼褐黃卵泡中FSHRmRNA的表達(dá)差異顯著高于F5卵泡和F3卵泡，與卵巢的表達(dá)水平差異極顯著。濟(jì)寧百日雞與羅曼褐相比，在15周卵巢和黃卵泡中BMPR

7、- IB mRNA表達(dá)水平差異極顯著。濟(jì)寧百日雞卵泡中IGFBP-4 mRNA表達(dá)顯著低于卵巢；而羅曼褐IGFBP-4 mRNA的表達(dá)變化不顯著。兩品種各級卵泡間變化不顯著。 試驗四：通過差異顯示RT-PCR得到雞卵巢組織差異表達(dá)基因7個。TPD52L2在濟(jì)寧百目雞和羅曼褐20周齡(產(chǎn)蛋早期)較15周(未開產(chǎn))卵巢中mRNA表達(dá)水平顯著上調(diào)；DNAJC8mRNA表達(dá)水平在濟(jì)寧百日雞和羅曼褐20周齡較15周卵巢中下調(diào)，差異極顯著；

8、LDHB mRNA表達(dá)水平在羅曼褐15周齡到20周齡表達(dá)下調(diào)，而在濟(jì)寧百日雞無顯著變化；其它TNRC6A表達(dá)上調(diào)，LOC771135、ChEST756m4、LOC772269表達(dá)下調(diào)，差異均達(dá)到顯著水平。 家禽的性成熟由一系列基因形成的基因網(wǎng)絡(luò)調(diào)控。本研究通過對．FSHR、BMPR-IB和IGFBP-4的序列分析、多態(tài)性檢測和表達(dá)分析，探討了它們與雞產(chǎn)蛋性能的關(guān)系；通過對卵巢組織在性成熟過程中基因表達(dá)的變化，找到了7個差異表達(dá)的