1、該研究以中國對蝦為材料,從病蝦組織中分離出白斑綜合征病毒(white spot syndrome virus,簡稱WSSV)野生毒株(暫時命名為浙江株,WSSV-ZJ),以該病毒基因組為模板,采用PCR技術擴增了WSSV-ZJ的囊膜蛋白VP28和VP19的基因,分別采用大腸桿菌和桿狀病毒-昆蟲表達系統進行了這兩個基因的表達研究,并初步試驗了蠶蛹表達產物在螯蝦抗對蝦白斑綜合征(WSS)的效果.主要研究結果如下:1.2001年5月從浙江省象

2、山縣某對蝦養(yǎng)殖塘采集患白斑病的中國對蝦,用WSSV的實驗模式動物克氏原螯蝦(Cambarus proclarkii)作了動物回歸試驗,試驗蝦在3~10天內幾乎全部死亡;用蔗糖密度梯度法純化的病毒在電鏡下的大小、形態(tài)特征與WSSV極為相似(完整的病毒粒子大小約100×400nm,核衣殼大小約60×350nm);以該病毒基因組DNA為模板,應用PCR技術,擴增出了WSSV的特異性條帶,從而從病毒的致病性、形態(tài)特征和特異性DNA片段等方面證實

3、了分離獲得的病毒是對蝦白斑綜合征病毒.2.利用PCR技術,擴增獲得了病毒的兩個囊膜蛋白基因,基因序列全長分別為615bp和366bp,編碼的氨基酸殘基數分別為204和121,它們與GenBank中登錄的WSSV囊膜蛋白VP28和VP19基因的同源性均在99﹪以上,而與其它病毒DNA片段的同源性則很低.3.將克隆到的vp28、vp19基因通過適當的酶切后插入到表達載體pET30a的多克隆位點中,獲得重組質粒pET30a- vp28和pET

4、30a- vp19.將它們導入E.coli.BL21中,在37℃下,經IPTG誘導表達4小時后,用SDS-PAGE和Western blotting進行檢測,發(fā)現vp28基因的表達產物均出現了明顯的特異性條帶,其融合表達產物的大小與預測的一致,而在vp19基因均未見表達產物的特異性條帶.4.為了獲得與天然vp28、vp19結構與活性較一致的表達產物,該研究采用了表達產物后加工較完善的桿狀病毒-家蠶表達系統.5.將含量組WSSV囊膜蛋白的