1、稻瘟病是水稻上重要的病害之一,其病原為子囊菌Magnaporthe grisea.了解 M.grisea的致病機理不僅有利于稻瘟病的防治,而且作為研究植物病原真菌與寄主互作的理想模式系統(tǒng),對于了解其它真菌的致病機理也有重要意義.致病相關基因的克隆和分析是達到這一目標的有效途徑.突變體的獲得及表型分析是鑒定致病相關基因的有效策略.獲得突變體的方法很多,如限制性內切酶介導的轉化,農桿菌介導的轉化,轉座子標簽技術等.然而,這些方法不能研究以下

2、基因:在實驗室條件下功能上多余的基因;在多個水平上都有作用的基因;低水平表達的重要基因.啟動子陷阱的方法,并不需要產生可見的功能缺陷,只需根據(jù)報告基因的表達就可將轉化子篩選出來,然后通過啟動子陷阱載體上的已知序列克隆目的基因.該研究,將啟動子陷阱的技術應用于稻瘟病菌,通過構建啟動子陷阱載體,利用限制性內切酶介導轉化,建立的突變體庫.研究結果如下:1.構建了啟動子陷阱載體pEGFP-HPH和pCB1003-EGFP,均具有具有潮霉素抗性基

3、因和無啟動子的eGFP基因;2.建立了稻瘟病菌遺傳轉化體系,轉化效率達到40-60個突變體/微克DNA;3.獲得突變體1077株,通過熒光顯微鏡檢測,489株突變體熒光表達,eGFP基因表達率45.4％;生長速度明顯比野生型減慢的突變體3株;菌落白色的突變體9株;產孢減少的有35株;致病性有所降低的菌株18株;隨機挑取8株突變體進行Southern雜交分析,可以雜交到強弱不同的信號.實驗數(shù)據(jù)表明,啟動子陷阱技術具有良好的前景,通過這種方