1、汕頭大學醫(yī)學院碩士學位論文碩士士學位位論文文題目題目CYR61在食管鱗癌細胞中的功能及其分子機制CYR61在食管鱗癌細胞中的功能及其分子機制英文題目英文題目TheRolesMolecularMechanismsofCYR61inEsophagealSquamousCellCarcinomaCells姓名馮財華學號10920007所在學院汕頭大學醫(yī)學院導師姓名李恩民教授許麗艷研究員專業(yè)生物化學與分子生物學入學日期2009年9月答辯日期20

2、12年06月汕頭大學醫(yī)學院碩士學位論文摘要CYR61是一種分泌性的細胞基質(zhì)蛋白，在許多腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮功能。迄今，CYR61在食管鱗癌中的功能尚不明確。本課題組以往曾研究發(fā)現(xiàn)，77例食管鱗癌病人組織，CYR61mRNA異常高表達病人的生存期較長（P=0.005），淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率較低（29%，P=0.034），提示CYR61可能抑制食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展。本文中，為了研究CYR61在食管鱗癌細胞中的生物學功能，我們通過綜合運用真核表達、si

3、RNA干擾、westernblot、平板細胞克隆形成、Transwell細胞移動實驗、細胞侵襲實驗、細胞粘附實驗和裸鼠爪墊注射等實驗技術(shù)手段，從正反兩個方面，體內(nèi)體外實驗進一步確證了CYR61蛋白在食管鱗癌細胞中發(fā)揮著“抑癌”作用：1）在EC9706和EC109等食管鱗癌細胞中，過表達CYR61抑制癌細胞的生長、促進癌細胞的粘附、抑制細胞的侵襲和移動；2）在KYSE180食管鱗癌細胞中，干擾CYR61表達，促進癌細胞的生長、抑制癌細胞的

4、粘附、促進細胞侵襲和移動；3）在荷瘤鼠中，過表達CYR61抑制癌細胞的生長與侵襲，而干擾CYR61表達則效果相反。為了揭示CYR61抑制食管鱗癌細胞侵襲與移動的分子機制，我們運用基因過表達、基因表達敲降、RTPCR、westernblot、流式細胞術(shù)、細胞免疫熒光染色等實驗技術(shù)手段，在EC9706、EC109和KYSE180等食管鱗癌細胞中，以CYR61蛋白的全長以及不同結(jié)構(gòu)域的缺失體（△m1△m4）相互對比，開展系列實驗研究。結(jié)果顯示

5、，1）結(jié)構(gòu)域Ⅱ與CYR61蛋白抑制癌細胞侵襲與移動的功能密切相關(guān)，而結(jié)構(gòu)域Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ與CYR61蛋白的這一功能的關(guān)聯(lián)性不強；2）CYR61的四個結(jié)構(gòu)域均與癌細胞的粘附能力相關(guān)；3）CYR61過表達，食管鱗癌細胞中的Actin應力纖維與粘著斑顯著增多，整合素α5β1的表達與激活受到明顯抑制；4）CYR61通過抑制整合素α5與FAK的表達，以及FAK與ERM的磷酸化，抑制食管鱗癌細胞的移動；這其中，CYR61的結(jié)構(gòu)域Ⅱ發(fā)揮著關(guān)鍵作用，而其他