酵母雙雜交系統(tǒng)用于對蝦白斑綜合癥病毒（WSSV）受體基因的篩選.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、對蝦白斑綜合癥病毒(WSSV)是對蝦暴發(fā)性流行病的主要病原,嚴重危害對蝦養(yǎng)殖業(yè).病毒入侵宿主首先要和其對應(yīng)的特異受體結(jié)構(gòu),深入了解WSSV感染機制,找到編碼受體的基因,無疑對病害的防治具有基礎(chǔ)性意義.該實驗利用酵母雙雜技術(shù)進行了受體篩選的初步研究工作.作者利用SMART(Switching Mechanism at 5' end of RNA Transcript)技術(shù),以同源重組的方式構(gòu)建了中國明對蝦鰓細胞的全長cDNA文庫.首先用R

2、NA提取試劑盒從中國明對蝦鰓細胞中提取總RNA,以總RNA為模板,CDS Ⅲ oligo(dT)為引物,反應(yīng)一段時間后,再加入轉(zhuǎn)換模板(switching template),繼續(xù)反應(yīng),反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈.再在DNA聚合酶下,通過長距離PCR,擴增雙鏈DNA.雙鏈cDNA經(jīng)凝膠過濾柱純化后,與線性化的pGADT7-Rec質(zhì)粒載體同源重組,轉(zhuǎn)化感受態(tài)AH109酵母菌株后,得到中國明對蝦鰓細胞的全長cDNA文庫.經(jīng)測量該文庫的容量為2

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