1、磺胺類藥物是獸醫(yī)臨床上使用最廣的一類化學合成抗菌藥,主要用于細菌感染性疾病和某些原蟲病的預防和治療.但使用不合理很容易造成組織中的殘留和蓄積.許多國家和組織規(guī)定了其最高殘留限量(MRLs)為0.1μg/g,甚至不得檢出.高效液相色譜、氣-質聯(lián)用等是磺胺類藥物殘留檢測的法定方法,但成本較高,方法繁瑣,不適于大量樣本的測定.酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測具有特異性強、靈敏度好且適合大批樣本快速測定的特點,在獸藥殘留檢測上的應用日益廣泛.關于各

2、磺胺類藥物殘留免疫法檢測的研究已有較多報道,但關于磺胺類藥多殘留(multi-residues)檢測的研究才剛剛起步,而且在理論和實踐中有許多問題需要解決.該研究通過化學法合成了兩種具有磺胺母核結構的半抗原,制備了對多種磺胺藥具有敏感性的多克隆抗體,并對多殘留免疫分析的基本規(guī)律進行了探討.另外,研制了磺胺甲基異噁唑(SMZ)抗體,建立了SMZ的ELISA檢測方法,并應用于牛奶中SMZ殘留的檢測.用對乙酰氨基苯磺酰氯(ASC)和對氨基苯甲

3、酸(PABA)為反應原料,經(jīng)過親核取代、水解等化學反應,合成了保留磺胺藥母核結構的半抗原化合物H1、H2,經(jīng)紫外掃描、紅外光譜、質譜、核磁共振以及免疫法鑒定為預期產(chǎn)物.用活性酯法和混合酸酐法將半抗原與載體蛋白偶聯(lián),制備了人工抗原,兩種免疫原H1-HSA、H1-BSA的結合比分別為10.3:1和9.6:l.用H1-HSA偶聯(lián)物免疫兔子,制備了抗磺胺類藥物抗體,抗體效價在1:l0萬以上.間接競爭ELISA表明,5種常用的磺胺藥SQ、SMM、

4、SMD、SMZ、SC的檢測限分別為0.065、0.046、0.045、0.032、0.015μg.ml,低于最高殘留限量0.1 μg.ml.但SD、SM<,2>的檢測限較高為0.86、1.0μg/ml.抗體有較高的特異性,常用的4種抗生素和3種磺胺類藥結構類似物與抗體無交叉反應,制備了酶標半抗原,并進行了直接競爭ELISA試驗.試驗結果表明磺胺藥N 1端R取代基的空間位阻、電子云和電荷的分布與密度是決定抗體識別藥物的重要因素.在牛奶介質

5、中各藥物的檢測效果優(yōu)于PBS介質中,添加SQ的回收率為76.5％~107.4％,建立的間接競爭ELISA法基本能滿足磺胺藥多殘留定性檢測的要求.用戊二醛將SMZ與載體偶聯(lián),以SMZ-BSA為免疫原制備了多克隆抗體和單克隆抗體.多克隆抗體具有較高的檢測靈敏度和特異性,以其建立了測定SMZ殘留的間接競爭ELISA方法.以SMZ濃度的對數(shù)為橫坐標,藥物對抗原抗體反應的抑制率為縱坐標,繪制了標準曲線.經(jīng)計算,該方法的檢測限是8.74ng/ml,