1、由Magnaporthe grisea引起的稻瘟病是嚴重為害水稻的重要病害之一,稻瘟菌已成為研究植物與植物病原真菌互作關系的模式菌,其致病性分子基礎的研究有助于理解稻瘟菌的致病機理,揭示稻瘟菌和水稻之間的互作關系,也將為新型、安全、環(huán)保藥物的設計和篩選提供豐富的潛在靶標.該論文開展了稻瘟菌致病基因的分離和功能分析等工作.通過篩選稻瘟菌REMI轉化體庫獲得對水稻感病品種梅雨明致病性減弱的突變體H680,與野生型菌株P131相比,突變體引起

2、的病斑數(shù)減少了95﹪,在洋蔥表皮上孢子萌發(fā)率、附著胞形成率和侵染釘形成率都有所下降,其中附著胞的降低幅度最大,接種洋蔥表皮48h后,附著胞形成率不再升高,60﹪以上的芽管沒有分化成附著胞,繼續(xù)進行營養(yǎng)生長.有性雜交和Southern印跡雜交結果表明,突變表型與插入標記共分離,而且是單位點、單拷貝插入.以插入質粒為標記克隆了目標基因.將拯救的毗鄰插入位點的基因組序列與稻瘟菌基因組全序列進行比較,發(fā)現(xiàn)質粒pUCATPH插入在contig2.

3、1287(65362bp)的19086bp位點處.contig2.1287的GENSCAN分析表明,插入位點兩邊有兩個基因,插入位點距離兩基因的翻譯起始密碼子ATG分別為171bp和233bp,前者僅含一個987bp的編碼區(qū),編碼328個氨基酸殘基的蛋白質,沒有內含子.另一個含兩個外顯子,編碼1115氨基酸殘基的蛋白質.用包含兩個基因的片段和含有距離插入位點較近的基因的片段構建互補載體分別轉化突變體,互補轉化體均恢復為野生型.從而證實質

4、粒插入影響的是距離插入位點較近基因的功能.因此推斷該基因在稻瘟菌侵入過程中主要控制附著胞的形成,直接影響其致病性.對該基因進行核苷酸BLAST分析,沒有發(fā)現(xiàn)與其同源的序列.GENSCAN預測該基因編碼328個氨基酸殘基的蛋白質.氨基酸BLAST結果顯示,推定的氨基酸序列含一個鋅指結構基序C2H2和核定位信號,并且與來自人、鼠、果蠅和擬南介的鋅指蛋白KIN17有37~47﹪的一致性.從水稻感病cDNA文庫中分離出該基因987bp的ORF.