1、上海交通大學博士學位論文人renalase的蛋白表達、抗體制備及抗體功能初探姓名：王鋒申請學位級別：博士專業(yè)：內(nèi)科學（腎臟病學）指導教師：汪年松201105上海交通人學醫(yī)學院博士學位論文行連接，構(gòu)建轉(zhuǎn)移載體pFastBacHTb—renalase，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DHl0Bac，得到重組轉(zhuǎn)座子rBacmid—renalase，進一步轉(zhuǎn)染High—V昆蟲細胞，Westernblot驗證后，將得到的真核重組renalase蛋白純化后保存。將re

2、nalase的PCR產(chǎn)物用限制性內(nèi)切酶Notl和Bglll雙酶切。同時對pBudCE41載體進行雙酶切，然后連接，構(gòu)建真核表達載體pBudCE41renalase，將此重組質(zhì)粒免疫小鼠并驗證。利用重組renalase蛋白為抗原，免疫家兔制備多克隆抗體。利用重組renalase蛋白為抗原，免疫Balb／c小鼠，應用雜交瘤技術(shù)，制各單克隆抗體。將獲得的抗體作為一抗對人的血清renalase表達進行Westernblot分析。將獲得的抗體作為

3、一抗對人腎組織renalase表達進行檢測。結(jié)果成功構(gòu)建了原核表達載體pET28arenalase，得到了原核重組renalase蛋白。Renalase在High—V細胞內(nèi)得到成功表達。成功構(gòu)建了renalaseDNA疫苗，小鼠的renalaseDNA免疫血清能夠識別原核表達的renalase蛋白。以原核重組renalase蛋白免疫小鼠，獲得了兩株高效價的單克隆抗體。該單克隆抗體能夠識別人血清與腎組織表達的天然renalase。結(jié)論利用