1、該研究以甘藍型冬性和半冬性油菜為主要材料,研究了影響冬性和半冬性油菜子葉外植體芽再生和遺傳轉(zhuǎn)化的因素;利用優(yōu)化的遺傳轉(zhuǎn)化體系,將擬南芥的細胞周期基因?qū)氪河筒薟estar中,研究了細胞周期基因?qū)τ筒嘶ǚ郯l(fā)育和形態(tài)發(fā)生的影響;此外,建立了一種利用超聲波分離油菜、小麥等花粉細胞核的新方法,借助流式細胞儀對野生型和轉(zhuǎn)細胞周期基因的油菜花粉細胞核進行了DNA含量分析.獲得的主要結(jié)果如下:1、通過對培養(yǎng)基、激素配比、預(yù)培養(yǎng)時間、蔗糖濃度等影響油菜

2、子葉外植體芽再生因素的優(yōu)化篩選,建立了適合于冬性和半冬性油菜子葉的優(yōu)化再生體系.將子葉在附加1mg/L BA和1mg/L 2,4-D的MSB5培養(yǎng)基中預(yù)培養(yǎng)3天,再轉(zhuǎn)入含有4.5mg/L BA的MMO培養(yǎng)基中培養(yǎng),可顯著增加芽再生率,并且可將再生周期比對照縮短1/3.在這一條件下10個冬性和半冬性油菜品種的平均再生率達80.82﹪,其中9個品種的芽再生率均在75﹪以上,最高可達98.89﹪.2、在業(yè)已建立的高效快速再生體系的基礎(chǔ)上,通過

3、優(yōu)化預(yù)培養(yǎng)和共培養(yǎng)時間,采用合適的選擇壓,建立了適用于冬性和半冬性油菜的子葉高效快速遺傳轉(zhuǎn)化體系.利用這一體系對8個品種進行遺傳轉(zhuǎn)化測試,結(jié)果遺傳轉(zhuǎn)化效率均在12.09﹪以上,最高的可以達到28.29﹪.PCR和DNA雜交分析證明了轉(zhuǎn)基因的整合及拷貝數(shù)的分布.同時,通過對預(yù)培養(yǎng)基的激素配比、MES、對無菌幼苗進行4℃低溫處理等因素進行優(yōu)化,降低了下胚軸褐化率,從而初步建立了適合于冬性和半冬性油菜下胚軸的遺傳轉(zhuǎn)化體系.3、通過對超聲波處理

4、時間、分離花粉培養(yǎng)基等因素的研究,利用超聲波破碎花粉壁法,成功地分離到比較純的油菜單核、二核和三核期花粉細胞核.這些核可用于流式細胞儀DNA含量分析和高純度的核DNA制備.利用此法,分離的花粉細胞核,并用流式細胞儀測定了兩個物種不同時期的花粉細胞核的DNA含量.首次探測到油菜成熟花粉群體中存在2n花粉核.4、利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化方法,將花藥特異啟動子控制下的細胞周期基因?qū)氪河筒薟estar中.并對周期蛋白基因CycD2轉(zhuǎn)基因后代的